蜱病原真菌的分离、鉴定及其生物学特性研究

【摘要】：蜱是寄生于动物体表的一类常见外寄生虫,同时又是多种疾病的传播媒介,是严重危害人畜健康,制约畜牧业发展的重要因素。传统化学药物防控方法随着蜱的耐药性产生和人们对环境安全的强调,越来越受到限制,蜱的免疫防治和利用天敌生物所开展的生物防治已成为该研究领域的研究热点。 本研究以小亚璃眼蜱和微小牛蜱两种硬蜱为研究对象,从不同来源的虫生真菌菌株中筛选对蜱具有高致病性的菌株,并系统的研究它们对蜱的致病性、生物学特性、与常用植物杀虫剂溴氰菊酯的相容性及液固双相培养条件的优化等。针对目前用于蜱防治药物的药效持久期短的技术难点,旨在探索适合蜱生物防治的新途径,通过将植物杀虫剂与对蜱高致病性的虫生真菌联合应用,初步研制蜱的生物防治制剂,为蜱的综合防治提供新思路。主要研究结果如下: 1.用选择性培养方法从不同生境来源的84份土壤样品和24份罹病僵虫中分离出虫生真菌29株,经过形态学及分子生物学方法进行了鉴定,其中:球孢白僵菌17株,金龟子绿僵菌11株,淡紫拟青霉1株。 2.采用体外药物浸渍法,经过生物测定,从分离的13株虫生真菌中筛选出对小亚璃眼蜱饱血雌蜱致病性较高的球孢白僵菌3株,并用微小牛蜱饱血雌蜱进行复筛,发现球孢白僵菌B.bAT17对两种蜱均有较高致死作用。 3.在菌药相容性试验中,观察了常用植物杀虫剂溴氰菊酯对球孢白僵菌B.bAT17菌株菌丝生长、孢子萌发的影响,结果表明,低浓度的溴氰菊酯与球孢白僵菌B.bAT17菌株具有较好兼容性,随着试验用药浓度的提高该菌株的菌丝生长和孢子的抑制作用加强。菌药协同试验证实,菌药混用的效果优于单独使用真菌制剂或溴氰菊酯,对蜱的致死率可达到100%。 4.采用单因素筛选方案对球孢白僵菌B.bAT17菌株最适基础培养基、培养温度、pH值、碳源、氮源、微量元素及液固双相发酵配方进行研究,发现该菌株在PDA、PPDA、PDAY、SDAY、SMAY五种培养基上均能较好生长,在PDA上生长最快,在PDAY上产孢量最大。温度对菌丝的生长和产孢影响显著,25°C菌丝生长最快,且产孢量最大。球孢白僵菌B.bAT17菌株在pH 4?10范围内均可生长,在偏碱性环境内生长最快,在pH 5?6的偏酸性环境内产孢量最大。综合评价真菌各项指标后,葡萄糖和酵母粉为菌丝生长和产孢的最佳碳源和氮源,固体物料麦麸+玉米粉+米粉与基础培养液3/4 SDAY按2:1均匀混合后,添加0.05% K~+可作为菌株固体发酵的最佳物料配方组合,为球孢白僵菌真菌制剂的规模化生产提供了实践和理论基础。