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《甘肃农业大学》 2011年
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大蒜病毒病原的分子鉴定与序列分析

李金娟  
【摘要】:大蒜是在全世界范围内普遍种植的一种蔬菜作物,生产中以无性繁殖为主,长期种植引起病毒积累,严重影响大蒜的生产及其产量。在大田生产中大蒜植株常受多种病毒复合侵染,不同病毒感染后往往表现出相似症状,加大了大蒜病毒的防治难度。本实验主要通过RT-PCR分子检测方法结合电子显微技术对大蒜病毒病原进行鉴定,对病毒基因进行克隆和序列分析,探讨了病毒DNA片段的变异与进化情况,为大蒜病毒的检测鉴定及危害性研究提供理论参考,为大蒜病毒的抗病育种提供研究基础。 1.通过扫描电镜显微技术,从大蒜叶片中观察到马铃薯Y病毒属(Potyvirus),麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)和马铃薯X病毒属(Potato Virus X)的病毒粒子的形态显微照片,对侵染大蒜的三种病毒属做了初步确定。 2.以甘肃“成县迟蒜”和山东“鲁蒜王2号”为实验材料,利用RT-PCR技术对其OYDV的外壳蛋白基因进行特异性扩增、克隆、核苷酸序列测定及分析。成功分离得到OYDV的2个DNA片段—GSCCS和SDLSW2,与GenBank中已报道的22个OYDV DNA片段的核苷酸相似性分别为81%-98%和81%-84%,氨基酸相似性分别为85%-99%和89%-94%,二者之间核苷酸相似性为84%,氨基酸相似性为89%。系统进化树显示不同DNA片段可聚为3个组群,GSCCS与中国山东金乡OYDV DNA片段同属一组,SDLSW2与其它16个OYDV DNA片段同属一组。表明OYDV在甘肃“成县迟蒜”和山东“鲁蒜王2号”中均存在,但具有一定差异,变异程度达到16%。 3.根据已发表的GCLV和LYSV引物,分别以甘肃“成县迟蒜”和山东“鲁蒜王2号”叶片总RNA为模板,进行RT-PCR分子检测,只在山东“鲁蒜王2号”总RNA中分别扩增得到长300bp和520bp的目的片段,并对其进行了克隆与序列测定。测得的GCLV的DNA片段与GenBank中已报道的14个不同DNA片段的核苷酸相似性最高达98%,氨基酸相似性最高达100%。GCLV的系统进化树可划分为3大类群,其中GCLV病毒DNA片段与来自日本的AB004804.1有较近的亲缘关系,同属于一组。测得的LYSV的DNA片段与GenBank中已报道的22个不同DNA片段的核苷酸相似性最高达97%,氨基酸相似性最高达100%。LYSV的系统进化树可划分为5大类群,其中LYSV病毒DNA片段与来自澳大利亚的DQ925452.1有较近的亲缘关系,同处于一个分支。以上分析可见,GCLV和LYSV病毒只存在于山东“鲁蒜王2号”中,而在“成县迟蒜”中不存在,表明大蒜中GCLV和LYSV病毒的分布具有地域特点。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S436.33

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【引证文献】
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