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《甘肃农业大学》 2012年
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TPHK对应激致大鼠肠黏膜损伤的防护作用初探

杨志华  
【摘要】:目的: 1.研究携带低氧诱导因子1α基因(HIF1α)和角质细胞生长因子基因(KGF)的重组减毒沙门菌(TPHK)对大鼠肠缺血再灌注应激致肠黏膜损伤的防护作用。 2.研究重组减毒沙门菌TPHK对高海拔缺氧条件下大鼠肠缺血再灌注应激致肠黏膜损伤的防护作用。 方法: 第一部分: 雄性Wistar大鼠144只,随机分为六组:正常对照组(NC组)、模型对照组(TC组)、单纯减毒沙门菌组(Ty21a组)、携带低氧诱导因子1α基因的重组减毒沙门菌组(TPH组)、携带角质细胞生长因子基因的重组减毒沙门菌组(TPK组)、携带低氧诱导因子1α基因和角质细胞生长因子基因的重组减毒沙门菌组(TPHK组),每组24只,每组设四个时间点(2h、6h、12h、24h),每个时间点6只。建立模型前7d开始给药(109pfu/只,隔日一次,共4次)。用药7d后,在无菌操作条件下建立肠缺血再灌注(I/R)动物模型;术后处死各组大鼠,分别收集血浆和小肠组织标本,分为两份;一份检测HIF1α与KGF的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)活力与丙二醛(MDA)含量,另一份进行组织病理学检测,初步探究TPHK对大鼠I/R应激损伤的防护作用。结果: 1.除NC组外各实验组小肠组织HIF1α表达水平的变化趋势为2h时升高,6h时达到高峰,之后下降,24h时TPH组和TPHK组HIF1α表达水平仍显著高于其他实验组(P0.01);且TPHK组HIF1α表达水平在I/R后6h、12h、24h均显著高于其他实验组(P0.01或P0.05)。 2.除NC组外各实验组小肠组织KGF表达水平的变化趋势为2h时升高,6h时,TC组、Ty21a组、TPH组KGF表达水平达到高峰,之后开始下降,而12h时TPK组和TPHK组KGF表达水平达到高峰,之后开始下降,24h时TPK组、TPHK组KGF表达水平仍较高;且TPHK组HIF1α表达水平在I/R后的2h、6h、24h均显著高于其他各实验组(P0.01)。 3.除NC组外各实验组小肠组织和血浆SOD活力的变化趋势为,2h时升高,6h时达到高峰,之后开始下降,24h时TPH组、TPK组和TPHK组SOD仍保持在较高活力; TPHK组SOD活力在I/R后的6h、12h、24h均显著高于其他各实验组(P0.01或P0.05),具有更好的抗氧化作用;且血浆SOD活力变化趋势较组织更为明显。 4.除NC组外其他各组小肠组织和血浆MDA含量总的变化趋势为2h时升高,6h时到达高峰,之后开始下降,在12h时TPHK组小肠组织MDA含量均显著低于其他各组(P0.01或P0.05);24h时,TPHK组小肠组织MDA含量显著低于其他实验组(P0.01),TPH组、TPK组和TPHK组血浆MDA含量均也显著低于其他实验组(P0.01)。且TPHK组血浆MDA含量在I/R后2h、6h、12h、24h均显著低于(P0.01或P0.05),TPHK组的过氧化物作用显著低于TPH组和TPK组。 5.组织病理学观察显示:再灌注24h时, TPHK组黏膜和腺体较TC组、Ty21a组、TPH组TPK组黏膜和腺体结构完整,隐窝深度较之也较深,少见炎性细胞的浸润,黏膜固有层结构近似正常。第二部分: 雄性Wistar大鼠24只,分为正常对照组(NC组)、模型对照组(TC组)、TPHK预防组(TPHK组)三组,8只/组。在急进高海拔地区(海拔3848米的马衔山)后,通过肠系膜上动脉I/R(60min/60min)建立高海拔缺氧条件下应激性肠黏膜损伤模型。建立模型前3d开始给各组对应的药物(109pfu/只),隔日给药1次,给药4次,于给药7d后处死大鼠,收集标本,200μL血浆进行生化检测,分析主要脏器功能状况;用ELISA法检测肠组织中HIF1α和KGF的表达水平,分析目的蛋白的表达情况;用比色法检测血浆和小肠肠组织中SOD和MDA的表达,分析氧化应激损伤的程度;小肠组织做HE染色,观察组织病理学变化;最后分析TPHK对高海拔条件下大鼠I/R损伤的防护作用。 结果: 1.生化指标检测显示,TPHK组CK-MB、AST、ALT、UREA和CRE的含量均显著低于TC组(P0.01),接近或低于正常组,表明TPHK对机体主要脏器无损伤作用; 2. TPHK组小肠组织中HIF1α表达水平均显著高于TC组(P0.01); 3. TPHK组小肠组织中KGF表达水平均显著高于TC组(P0.01)。 4. TPHK组血浆和小肠组织中SOD活力均显著高于TC组(P0.01); 5. TPHK组血浆和小肠组织中MDA含量均显著低于TC组(P0.01); 6.组织病理学观察显示,TPHK组较TC组小肠黏膜和黏膜腺体轮廓清楚较为完整,隐窝明显,黏膜层和黏膜固有层较完整。 结论 1. TPH、TPK和TPHK均对大鼠肠I/R应激致肠粘膜损伤有防护作用;TPHK防护作用优于TPH与TPK,推测KGF和HIF1α可能有协同防护作用。 2. TPHK对高海拔缺氧条件下I/R应激导致的肠粘膜损伤有一定的防护作用。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S858.91

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【参考文献】
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