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西(籽)瓜杂交种种子纯度鉴定及指纹图谱构建的研究

张高原  
【摘要】:本文利用SSR分子标记技术,对西(籽)瓜杂交一代种子纯度鉴定进行研究,并与田间鉴定结果进行对比,成功构建了一套简便、快捷、准确可靠的SSR种子纯度鉴定方法,同时,对16份西瓜品种指纹图谱构建进行研究,并进行遗传相似和聚类分析。主要研究结果如下: 1.比较CTAB-子叶、CTAB-真叶、CTAB-种子、SDS-子叶、SDS-真叶和SDS-种子这6个处理组合,发现CTAB法提取西(籽)瓜DNA的总体效果较SDS法好,叶片提取效果较种子好。 2.试验优化的西(籽)瓜种子纯度鉴定的PCR反应体系为:反应总体积25μl,其中包括25mmol/L镁离子2μl、5U Taq DNA聚合酶0.2μl、10pmol/L上下游引物各1.5μl、2.5mmol/L dNTPs1.5μl、10×Reaction Buffer2.5μl、50ng/μl模板DNA1~2μl、然后加ddH2O至25μl;采用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳,电压90V,时间2.5h。 3.比较四种银染方法,得出方法四较前三种方法具有所需药品少,成本低,染色显影时间短,背景浅且条带清晰等优点。 4.通过83对SSR引物的筛选,得到了3对稳定性强、可重复性好、在杂交种及其母本之间具有多态性的引物,然后分别用SSR和田间两种鉴定方法,对比鉴定结果,两者完全一致,SSR鉴定准确率达100%。 5.利用6对多态性引物组合,成功将16份西瓜杂交种大致分为3大类,它们之间的遗传相似系数范围为0.363~0.864,平均0.641,构建了16份西瓜杂交种的数字指纹图谱。


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