收藏本站
《甘肃农业大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

H5N6亚型禽流感病毒NS1蛋白的鸭宿主互作蛋白鉴定

周圆一  
【摘要】:A型流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起人和多种动物的高度接触性急性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)划分为通报疫病。非结构蛋白NS1蛋白(nonstructural protein 1,NS1)通过与细胞内的多种宿主蛋白发生相互作用来调节流感病毒的感染过程,是调节AIV致病性的关键因子。为鉴定与H5N6亚型禽流感病毒NS1蛋白有相互作用的宿主蛋白,本研究:1.Strep标签H5N6重组AIV的构建。用RT-PCR扩增HN109病毒的8个基因片段,分别连接到pBD双向转录表达载体。通过点突变技术将NS1基因的77-84位的氨基酸替换成Strep标签。将8个重组质粒共转染293T细胞,拯救出重组病毒株rHN109-NS1-Strep。经测序验证,拯救病毒的8个基因片段与设计基因一致。测序比对与蛋白表达验证Strep标签可以稳定遗传于F5代以内的重组病毒;重组毒株与野生毒株在MDCK细胞上复制水平相似,在小鼠体内复制能力也相似。2.鸭肺原代上皮细胞的分离培养与鉴定。用组织贴块法从24 d SPF鸭胚中分离肺原代细胞,经差速消化法纯化传代,纯化三代后,靶标上皮细胞标识蛋白钙粘蛋白和广谱角蛋白进行免疫荧光检测,显示90%以上细胞表达阳性,因此鉴定为上皮细胞。3.HN109-NS1-strep与鸭宿主互作蛋白的鉴定。重组病毒与野生病毒分别感染鸭肺上皮细胞(MOI=5)。感染24 h后裂解细胞,4℃离心,收集上清经Strep树脂进行NS1互作蛋白的纯化。纯化样品进行Western-blot和质谱鉴定分析。结果共鉴定出36种与NS1有相互作用的宿主蛋白。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.65

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李伟;王松;李宁;;我国禽流感的研究进展及成就[J];当代畜禽养殖业;2018年06期
2 华宇;;如何面对禽流感?[J];紫光阁;2004年03期
3 魏传芳;李咏梅;;禽流感病毒与人类流感病毒的关系[J];莱钢科技;2006年02期
4 何浙生;;禽流感病毒的生物学特性与检测方法[J];浙江检验医学;2004年01期
5 曹蓝;马钰;陈艺韵;鲁恩洁;李魁彪;狄飚;;2016年广州市禽类交易市场禽流感病毒监测与分析[J];中国卫生检验杂志;2018年05期
6 王路;惠永华;赵建东;卫陆梅;王伟杰;燕素萍;;不同禽流感病毒实时荧光RT-PCR试剂盒的比较[J];黑龙江畜牧兽医;2016年24期
7 ;韩国检出新型禽流感病毒[J];吉林畜牧兽医;2017年02期
8 戈军珍;;面对H7N9我们应该知道什么?[J];兽医导刊;2017年05期
9 ;科技[J];中国畜牧业;2017年01期
10 赖永洁;李靖;;禽流感病毒对人类致病的研究概述[J];饲料与畜牧;2017年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈化兰;;禽流感病毒与公共卫生[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
2 春阳;李东;;再论“以科学发展观应对禽流感事件”——评禽流感病毒变种两次恐慌论[A];首届中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2008年
3 邓洁丽;段明星;俞初一;江龙;;聚联乙炔有序组装体在识别禽流感病毒方面的应用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
4 李娇;王金良;管宇;沈志强;;禽流感病毒诊断方法的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
5 孙恩泽;谢敏;赵海粟;黄碧海;刘书琳;张万坡;张志凌;王汉中;庞代文;;量子点标记禽流感病毒[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
6 刘桂林;王志宇;张珊珊;;RNAi技术及其在抗禽流感病毒感染中的应用[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
7 王志宇;张议文;刘桂林;;禽流感病毒的分子生物学研究进展[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
8 王志宇;刘桂林;张议文;梁仲;张珊珊;卫吉芸;;禽流感病毒的分子诊断技术[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年
9 刘丽玲;王秀荣;陈化兰;;real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
10 李艳华;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草药的研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刁有祥;规模化鸭场禽流感的防控措施[N];河北科技报;2017年
2 本报记者 董碧水;杭州全面防控禽流感 禽蛋业遭受打击[N];中国青年报;2013年
3 记者 王梦婕 实习生 谢宛霏;北京进入防控禽流感应急状态[N];中国青年报;2013年
4 记者 李大庆;H5N6禽流感病毒基因起源和进化机制破解[N];科技日报;2016年
5 北京商报记者 陶凤 初晓彤;圣诞遇上禽流感 法国鹅肝告急[N];北京商报;2016年
6 本报记者 李颖;我国尚未发现H5N6,但应警惕H7N9[N];科技日报;2017年
7 北京地坛医院主任医师 蔡晧东;禽流感 感染人类并不容易[N];健康报;2017年
8 本报记者 罗晖;H7N9禽流感病毒尚不会造成大范围传播[N];科技日报;2017年
9 记者 唐梦霞 通讯员 张雪海 江歆;我省关闭各县活禽交易市场[N];浙江日报;2017年
10 记者 慈玉鹏;与流感“共舞”[N];北京科技报;2017年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 璩骁;H5N1禽流感病毒小鼠致病性的分子基础[D];武汉大学;2015年
2 王军政;鸭源禽流感病毒的分离鉴定及其聚合酶活性研究[D];吉林农业大学;2015年
3 李知新;宁夏禽流感流行病学调查及病毒HA基因遗传进化分析[D];甘肃农业大学;2017年
4 钱忠明;华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布以及从家养水禽和鸡中分离的H5亚型禽流感病毒HA基因的分子流行病学[D];扬州大学;2004年
5 陈素娟;用不同鸡痘病毒载体构建单表达或双表达抗H5和H9亚型禽流感的重组疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
6 李呈军;中国H9N2亚型禽流感病毒进化分析与H5N1亚型禽流感病毒标记疫苗的研究[D];中国农业科学院;2005年
7 李宝全;H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析[D];山东农业大学;2005年
8 肖运才;禽流感病毒ELISA快速检测试剂盒的研制及其重组核蛋白粘膜免疫研究[D];华中农业大学;2005年
9 吴仁蔚;禽流感病毒重组蛋白粘膜免疫研究及NP-ELISA抗体检测方法的建立[D];华中农业大学;2006年
10 王承宇;H5N1亚型禽流感精制免疫球蛋白及靶向重组免疫毒素的制备与评价研究[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周圆一;H5N6亚型禽流感病毒NS1蛋白的鸭宿主互作蛋白鉴定[D];甘肃农业大学;2018年
2 吕嘉敏;一株洞庭湖自然保护区豆雁H6N2亚型禽流感病毒全基因组遗传特征分析[D];华东师范大学;2017年
3 孟丹;PA基因影响H9N2亚型禽流感病毒致病性和气源性传播的研究[D];山东农业大学;2017年
4 路化梅;奥司他韦羧酸衍生物抗N2型禽流感病毒的活性研究[D];山东农业大学;2017年
5 孙文琪;2014~2016年华东地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化分析及气溶胶传播特性研究[D];扬州大学;2017年
6 金新;禽流感病毒M2蛋白相互作用宿主蛋白的筛选及初步的功能学研究[D];吉林农业大学;2017年
7 王棋;表面展示禽流感病毒HA2蛋白新功能型乳酸菌分子免疫机制的研究[D];吉林农业大学;2017年
8 张恒;2015-2016年鄱阳湖地区禽流感病毒分子流行病学研究[D];中国疾病预防控制中心;2017年
9 林慕蕾;广东省人感染H7N9禽流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性及分子特征研究[D];南方医科大学;2017年
10 孟菲菲;H5N1亚型禽流感病毒NA基因茎部缺失拮抗干扰素的机制研究[D];扬州大学;2017年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026