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《甘肃农业大学》 2018年
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李斯特菌致病性的研究及部分基因的功能分析

杜秀嫒  
【摘要】:李斯特菌(Listeria)是一类革兰氏阳性胞内寄生菌,该属有7个种,按致病性的有无可分为两个大类,其代表菌单增李斯特菌能适应各种环境(例如低温、高pH值、高盐等),可感染多种动物。1962年Murry等首次报道李斯特菌病以来,此病已陆续在许多国家发生,尤其在近20年以来,单增李斯特菌引起的食物中毒情况日趋严重。为了进一步研究李斯特菌的致病性,本论文完成如下研究:(1)三种李斯特菌感染小鼠的试验为了研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria moncytogenes,Lm,简称单增李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L.ivanovii,Li)和韦氏李斯特菌(L.welshimeri,Lw)的毒力差异,将这3种细菌分别腹腔接种昆明系小白鼠建立人工感染模型,观察感染小鼠临床症状及死后病理变化,取其肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织制作石蜡切片、H.E染色后进行病理组织学检查。结果显示,小鼠感染2~5 d后出现典型症状,7 d后基本恢复正常;单增李斯特菌的致病性最严重,主要损伤肾、肝;伊氏李斯特菌次之,主要损伤脾、肝;韦氏李斯特菌的致病性最弱,主要损伤肺、肝。(2)单增李斯特菌侵染巨噬细胞的转录研究为了研究单增李斯特菌致病性的分子机制,通过梯度筛选以1:35的最适比例,将单增李斯特菌侵染RAW264.7小鼠腹腔巨噬细胞,分别提取侵染0 h、4h、8 h李斯特菌的总RNA进行转录组测序,对测序结果进行分析,筛选出578个差异表达基因,其中有487个下调基因,91个上调基因;GO富集分析表明存在1 090个显著差异表达的基因,其中137个上调基因,953个下调基因,这些基因属于GO terms中的3大类:与生物过程相关的有601个基因、分子功能相关的有449个、细胞组分相关的有40个。将差异表达的基因在KEGG数据库中进行注释比对,在所有差异表达基因其中有710个基因被注释到170种不同的生理途径中。应激反应过程通过不同的环境信号,细菌通过调节多种细胞内酶的数量和活性来适应新环境,在侵染互作过程中核糖体蛋白合成效率降低与L25蛋白表达量下降有一定的联系和应激反应途径,sRNA结构发现预测的靶基因集富集到甲基转移酶的活性、ABC转运蛋白的功能、RpiR家族转录监管机构的功能及复制DNA解旋酶的活性上。(3)Sigma B和Zurr的功能分析为了研究Sigma B、Zurr基因在单增李斯特菌中的调控机制,设计特异性引物对毒力调控因子Sigma B基因及其Zurr基因进行扩增并构建克隆载体,对相关序列进行氨基酸组成、抗原指数、抗原表位、二级结构及三级结构预测的相关生物信息学分析。结果表明,Sigma B与DNA结合转录因子活性、核酸结合转录因子活性、蛋白结合转录因子活动、核心RNA聚合酶结合转录因子的活动等过程中起到一定程度的调控作用;Zurr基因在结合转录因子、核酸绑定、DNA结合、阳离子绑定、金属离子绑定等过程中起到一定的调控作用,Zurr编码的蛋白对锌的吸收起到调控作用。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.61

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