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《甘肃农业大学》 2018年
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LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏内分布的研究

马俊兴  
【摘要】:为探究LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺组织中的定位和表达,探讨这两种细胞因子对牦牛肺脏低氧适应性结构形成的可能调控作用。论文选取新生(1~7日龄)、半岁(5~6月龄)、成年(3~6岁)和老年(7~10岁)健康牦牛肺组织样品作为研究对象,首先采用RT-PCR技术克隆牦牛LRPP6和VEGFR2基因序列,并进行相关生物信息学分析;之后运用qRT-PCR、ELISA和Western-blot实验方法,从mRNA和蛋白两个方面探讨不同年龄牦牛肺脏中LRP6和VEGFR2的表达情况;最后采用免疫组织化学技术,对LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏内的准确的分布位置和表达量进行研究。结果表明:1.克隆得到牦牛LRP6基因(GenBank登录号:MF776096),其牦牛开放阅读框长度为624bp,起始密码子位于41bp处,终止密码子位于664bp处,编码207个氨基酸。同源性分析和系统进化树显示,牦牛LRP6基因与野牦牛、北美野牛和绵羊的进化水平较为相近,与人、猕猴和食蟹猴进化水平较远。克隆得到牦牛VEGFR2基因(GenBank登录号:MF590245),其牦牛开放阅读框长度为312bp,起始密码子位于96bp处,终止密码子位于407bp处,编码103个氨基酸。同源性分析和系统进化树显示,牦牛VEGFR2基因与瘤牛、家牛和野牦牛的进化水平较为相近,与小鼠、褐鼠和人进化水平较远。2.LRP6和VEGFR2基因mRNA和蛋白在牦牛肺脏的表达模式相同,表达量从新生到老年均呈增长趋势。LRP6和VEGFR2在初生和半岁牦牛组之间的表达量差异不显著(P0.05),初生、半岁和老年组牦牛的表达量差异均显著(P0.05),成年和老年牦牛组之间的表达量差异显著(P0.05)。牦牛LRP6和VEGFR2基因mRNA主要在老年牦牛肺脏组织中表达,其余年龄组有少量表达,这可能与牦牛生长调控机制作用有关。3.LRP6主要分布于肺内支气管和其分支的上皮细胞以及肺泡Ⅱ型细胞,其表达较强;少量分布在肺血管内皮细胞和管壁平滑肌细胞,表达较弱;VEGFR2主要分布于肺内支气管及其分支的上皮细胞、管壁平滑肌细胞和肺泡隔细胞以及肺泡Ⅰ型细胞中,其表达较强;在肺血管内皮细胞和平滑肌细胞内也有分布,但表达较弱。这两种因子可能参与了牦牛肺脏气道和肺动脉的结构的形成。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S823.85

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