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《甘肃农业大学》 2020年
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炭当归多糖干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤作用机制研究

李琛琛  
【摘要】:当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels干燥根,属甘肃道地药材之一,具有活血、补血、抗炎等功效,其活性成分包括挥发油、有机酸、多糖等,当归多糖具有调节免疫、抗氧化等作用。炭当归(CAS)是当归的炮制品之一,炭当归多糖(CASP)为其主要功能性成分之一。本文通过免疫炎症因子、病理组织学分析,结合串联质量标签标记技术(TMT)和质谱多反应监测(MRM)验证目标蛋白,探究头孢噻呋钠联合LPS所致肝损伤的发生机制及炭当归多糖的保护作用机制。试验样本分为前期实验采取的正常对照组(Control)组、模型组(Model)、炭当归多糖低剂量组(CASPL,0.125 g/kg/d)、炭当归多糖高剂量组(CASPH,0.25 g/kg/d)鸡血清和肝脏样本。通过ELISA法检测IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α及TGF-β含量,并进行病理学组织学检查,结合TMT技术鉴定肝脏蛋白,筛选出差异蛋白并结合MRM技术对其进行验证。研究结果如下:1、与Control组比较,Model组IL-1β、IL-6、TNF-α含量极显著升高(P0.01),IL-4、TGF-β含量显著降低(P0.05),IL-10含量极显著降低(P0.01)。与Model组相比,CASPH组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P0.05),IL-6含量极显著降低(P0.01),IL-4、TGF-β含量显著升高(P0.05),IL-10含量极显著升高(P0.01),CASPL组的IL-1β、TNF-α含量显著降低(P0.05),IL-10含量显著降低(P0.05)。与Control组相比,Model组肝细胞坏死,肝小叶辨识困难,空泡变性等。与Model组相比,CASPH组肝细胞结构较完整,变性坏死显著减轻,而CASPH组比CASPL组改善更明显。2、在Control、Model、CASPH组肝脏共鉴定到6662个蛋白,Model/Control显著差异蛋白206个,其中128个上调,78个下调,CASPH/Model显著差异蛋白745个,其中535个上调,210个下调,主要参与糖代谢、脂质代谢、氨基酸代谢及炎症相关通路,都主要富集到免疫相关通路。3、筛选的19个候选蛋白验证,TMT和MRM定量分析结果总体趋势一致性较高,从中筛选出7个目标蛋白(COX7A2L、FCER2、AGXT、CD34、GCAT、CYP2AC1、TBXAS1)与肝损伤、保肝机制关系密切,可能是CASP干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤的作用机制的标志蛋白。综上所述,头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤的作用机制与免疫炎症反应、氧化应激、氨基酸代谢、组织修复等关系密切。CASP具有缓解肝损伤程度、调节机体免疫反应和修复肝脏损伤的作用,可能通过调节炎症因子,以及下调肝脏中FCER2和TBXAS1、上调CD34、AGXT、GCAT、COX7A2L和CYP2AC1蛋白表达,来恢复免疫相关通路异常情况,减弱造模因子引起的氧化应激损伤程度,恢复氨基酸代谢紊乱以及调节多种相关酶的分泌来促进肝组织修复,发挥保肝效果。
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