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《甘肃农业大学》 2000年
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农杆菌介导的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因转化马铃薯的方法研究

刘建荣  
【摘要】: 本试验在国内首次用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因对马铃薯进行 了转化,并对以马铃薯叶盘和茎段为外植体的再生系统和根癌农杆菌介 导的转化系统进行了优化研究。供试菌株LBA4404含有质粒pCGⅡ, 为几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的双价表达载体,两种酶可表达于细 胞间隙。实验结果如下: 优化的马铃薯再生系统中,愈伤组织诱导阶段的培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L和MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 2.0mg/L。分化阶段 叶盘愈伤组织的培养基为MS+GA_3 5.0mg/L+6-BA 2.2mg/L和MS+GA_3 5.0mg/L+KT 2.0mg/L+6-BA 2.2mg/L,茎段愈伤组织为MS+GA_3 5.0mg/L+6-BA 2.2mg/L。 愈伤组织诱导和分化过程中以加卡那霉素(Kan)100mg/L进行筛 选,再生苗生根阶段以加Kan50mg/L进行筛选。 优化的马铃薯转化系统中,农杆菌浓度以OD_(600)为0.5最佳,AS浓 度为50μmol/L时对转化的促进作用最强。外植体适宜的预培养时间、 侵染时间和共培养时间,叶盘分别为3天、15~20分钟和4天,茎段分 别为2天、10~15分钟和4天。 用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因对马铃薯进行转化,由“韩Ⅱ” 品种叶盘和茎段经诱导均获得了抗卡那霉素(Kan~R)愈伤组织,转化率 分别为86.3%和81.5%,苗分化率分别为32.1%和11.1%。进行胭脂碱分 析表明Kan~R转化植株有胭脂碱的合成。并初步测定Kan~R转化植株对 Fusarium spp和Rizoctonia solani有一定的抗性。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S532.035.3

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