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《甘肃农业大学》 2001年
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农杆菌介导的mtlD基因转化马铃薯的研究

巩慧玲  
【摘要】: 来自于大肠杆菌的mtlD(1-磷酸甘露醇脱氢酶)基因,被转入烟草中能诱 导甘露醇的合成和积累,增强了转基因植株的耐盐性。本研究利用mtlD基因 对马铃薯普通栽培种和双单倍体材料进行遗传转化研究,探讨mtlD基因对马 铃薯的耐盐作用,试图为提高马铃薯的耐盐性或创造耐盐种质资源探索一条新 途径。 本研究建立了马铃薯基因转化受体系统,探讨了根癌农杆菌介导的马铃薯 基因转化的合适条件,并对转化植株进行了PCR分子检测和耐盐性的初步鉴 定。结果如下: 建立的马铃薯基因转化受体系统是:以马铃薯四个普通栽培种和三个双单 倍体材料的试管苗叶片、茎段外植体作为转化受体;以M_1培养基作为植株再 生培养基,即MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L,2-3周后转至MS+GA_3 5mg/L+6-BA 2.25mg/L;以Kan 50mg/L、25mg/L分别作为双单倍体材料愈伤 组织诱导分化和生根的选择压,普通栽培种则采用75mg/L、50mg/L的Kan浓 度。 适于根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化的最佳条件是:外植体预培养两 天,农杆菌浓度OD_(600)为0.2,侵染外植体10分钟,共培养3天后进行选择培 养。另外,选择生长状况良好的外植体、培养基中添加一定浓度的AS及适宜 的Ca~(2+)均能提高转化率。 对获得的普通栽培种Atlanic和Irish cobbier的Kan~R植株进行PCR分子检 测,部分Kan~R植株扩增出1kb左右的目的片段,初步表明mtlD基因已导入受 体基因组中。对转化植株进行NaCl胁迫,部分转化体能耐0.8%的NaCl(而对 照却不能),表明mtlD基因的导入增强了马铃薯的耐盐性。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S532.034

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【引证文献】
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1 张俊莲;利用拟南芥液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)改良马铃薯耐盐性的研究[D];甘肃农业大学;2006年
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【参考文献】
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2 李东魁;转BADH基因马铃薯的耐盐性鉴定[D];甘肃农业大学;2007年
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