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《甘肃农业大学》 2002年
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四倍体刺槐高频再生体系的建立及农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化的研究

李小玉  
【摘要】: 四倍体刺槐是韩国培育出的刺槐新品种,属无刺类型,其叶片大小为普通二倍体刺槐的4倍,蛋白质含量为1.4倍多,不但可以作为先锋树种广泛应用于环境美化和生态建设中,还可作为饲料、蜜源和木材等不仅具有较好的生态效益,同时还具有很高的经济价值。为了进一步提高四倍体刺槐的耐盐性和抗旱性,进一步扩大其适宜种植的生态范围,充分发挥其固氮、改良土壤的特性,在我国的城镇绿化、荒山造林、盐碱地改良以及采矿迹地、公路、铁路边坡等植物生长困难土地的植被恢复中发挥其优势,本实验对四倍体刺槐进行了农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化的研究。据资料检索,该研究属首次将具有生产意义的目的基因导入四倍体刺槐,也是首次将甜菜碱醛脱氢酶基因导入林木树种,在培育耐盐抗旱型林木品种方面进行了有益的探索。 本实验首先以生长良好的四倍体刺槐优株上当年生新梢的带腋芽茎段为外植体,研究了在四倍体刺槐高频再生体系的建立过程中不同基本培养基、不同激素浓度及其配比、不同蔗糖浓度对愈伤组织的诱导、芽的分化及生根的影响;然后在得到高频再生体系的基础上,通过农杆菌介导法转化甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因,以GUS染色组织分析为依据探讨了影响转化效率的各种因素,建立了高效、可重复的基因转化体系,为四倍体刺槐目的基因的导入打下了基础。试验取得如下研究结果: 1.建立了四倍体刺槐高频再生基因转化受体系统。在四倍体刺槐以茎段为外植体诱导愈伤组织的过程中,以MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5mg.L-1+蔗糖30g.L-1效果最好,愈伤组织的诱导率可高达88.4%;在芽的分化中以MS+6-BA2.0mg.L-1+IBA0.2mg.L-1+蔗糖30g.L-1分化率最高,每块愈伤组织的平均分化芽数可达到11.3个;诱导生根以I/2MS+NAA1.0mg.L-1+蔗糖30g.L-1效果最佳,生根率可达95%以上;在移栽时,先在温室中驯化炼苗15~20天后移入大田,成活率可达93%以上。  2.建立了四倍体刺槐高效遗传转化体系。以农杆菌菌株LBA4404介导甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)的转化,首先确定了转化培养中最佳的抑菌素及其浓度和选择压:头孢霉素(Cef)400mg/L可有效地抑制农杆菌菌株 LBA4404的生长;卡那霉素50炒时四倍体刺槐愈伤组织的白化死亡率 达973%。并进一步优化了转化体系:以愈伤组织为外植体,转化效率较 理想;用叩值*.8)较低的分化培养基 MS历E 刀mg/L+IBAO.Zing/L 活化农杆菌可提高转化效率;AS可显著提高转化效率,其浓度以 20 t 时效果最好;菌液浓度对转化效率也有影响,以OD。s。值0.3~0.7为宜; 侵染前预培养1~2天,可显著提高转化效率;侵染时间以4~8分钟为宜; 共培养时间3~4天较适合;转化后暗培养对转化效率没有影响;选择方 法以延迟选择15天选择转化率最高。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q78

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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10 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 杜丽;香樟体胚发生途径的植株再生体系的建立以及农杆菌介导遗传转化的初步研究[D];华中农业大学;2005年
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1 申展;闽楠无性繁殖技术研究[D];中南林业科技大学;2013年
【二级参考文献】
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7 李海民;详谈四倍体刺槐(八)[N];中国花卉报;2003年
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