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《甘肃农业大学》 2002年
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口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC的克隆及3AB基因在大肠杆菌中的表达

曹轶梅  
【摘要】: 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的多种偶蹄动物高度接触性传染病。口蹄疫病毒是小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(aphthovirus)的成员,该病毒感染动物尤其是反刍动物以后,会形成无症状的持续性感染或隐性感染,注射疫苗的动物当再次接触新病毒时,也会成为隐性带毒者,从而给口蹄疫的诊断和防制带来严重的影响。因此,如何判断隐性感染动物以及区别注苗动物和自然感染动物是口蹄疫防制技术研究的一项重要内容。 本试验从感染FMDV的细胞中提取总RNA,用设计的特异性引物,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得了长度约为1500bp左右的核酸片段,与预期长度相符。扩增产物连接到pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌DH5α菌株,筛选氨苄青霉素抗性菌落,提取质粒经酶切鉴定、PCR分析以及确证性测序证明,所克隆的1500bp左右的片段含有完整的3ABC基因,与国外参考序列相比,同源性在99%以上。将重组质粒pGEM-3ABC和表达载体pTriEx-4Neo分别用SalⅠ和BglⅡ与XhoⅠ和BglⅡ消化后,亚克隆3ABC基因至原核表达载体pTriEx-4 Neo中,通过酶切鉴定、PCR扩增以及序列分析,发现克隆到pTriEx-4Neo载体上的片段于3ABC基因708bp处出现了17bp的缺失,碰巧在3AB基因后形成一终止密码子,但3AB基因的阅读框架完整,选出含有3AB基因完整阅读框架的阳性克隆,用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,结果表明,3AB基因在大肠杆菌中成功表达,其表达产物为分子量33.5ku的融合蛋白,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析,表达量占总蛋白量的26%以上。该项研究为应用FMDV非结构蛋白基因表达产物为抗原建立鉴别诊断的方法提供了材料。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.65

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 刘萍;口蹄疫病毒3C基因的真核表达及其诱导宿主细胞凋亡的研究[D];甘肃农业大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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1 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
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9 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
10 宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年
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【同被引文献】
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5 王钢;口蹄疫病毒VP1基因的序列分析及巢式PCR检测研究[D];四川农业大学;2005年
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7 杜宇;猪O型口蹄疫病毒VP_1基因的原核表达及重组蛋白的反应原性检测[D];山西农业大学;2005年
8 赵磊;抗口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和抗原模拟表位的筛选[D];安徽农业大学;2008年
9 徐宗香;口蹄疫病毒VP2蛋白B细胞线性表位的鉴定[D];东北农业大学;2009年
10 孙晓智;口蹄疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立与评价[D];内蒙古农业大学;2007年
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