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《甘肃农业大学》 2003年
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口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1基因的克隆及其原核表达

李平花  
【摘要】: 口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)引起的牛、羊、猪等偶蹄动物感染的一种烈性传染病,该病的发生和流行严重危害畜牧业的健康持续发展,造成巨大的经济损失,因此世界各国相当重视对该病的研究和防制。本研究根据FMDV China99的基因序列设计特异引物,以阳性质粒AHP1为模板,采用PCR技术扩增P1基因。扩增产物P1基因经限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ消化后,得到目的基因VP2-3-1。将目的基因与NcoⅠ和XhoⅠ消化的载体pProEX-HTb连接后转化宿主菌BL21(DE3)。挑选单菌落,用电泳、酶切、PCR扩增和序列分析鉴定筛选阳性重组质粒pProEX-VP2-3-1。重组阳性菌用Isopropyl-D-galactoside(IPTG)诱导表达,收集不同培养时间的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blotting分析。结果表明口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1在大肠杆菌中成功表达,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经凝胶薄层扫描分析表达蛋白约占菌体总蛋白的18%~25%。进一步的实验证明表达的目的蛋白以包涵体的形式存在,包涵体经变性裂解、镍柱层析纯化和复性后得到有一定生物活性的目的蛋白。本研究为利用基因工程表达产物建立FMD的快速诊断方法提供了材料。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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5 金华利;口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2004年
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9 况文东;RGD基序邻近氨基酸突变对口蹄疫病毒生物学特性的影响[D];中国农业科学院;2012年
10 张娅;利用转基因胡萝卜表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1[D];西北农林科技大学;2004年
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