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《甘肃农业大学》 2003年
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奶牛胚胎移植相关技术的研究

巨向红  
【摘要】: 本研究选用高产黑白花奶牛为实验对象,对几种诱导超排和胚胎冷冻保存方法进行了深入系统的比较和筛选,旨在为胚胎移植技术的商业化推广提供理论依据和实践指导。研究表明:在诱导超排的不同方案中,处理1(CIDR(阴道孕酮硅胶栓)+pFSH(CA)+PG-600(A)法)的按时发情率明显低于处理2(CIDR+pFSH(CA)+氯前列烯醇法)和处理3(CIDR+pFSH(C)+氯前列烯醇法),三组的按期发情率分别为70%、100%和100%。处理1和处理2、处理3供体牛在卵巢增幅上有很大差异(P<0.05),处理1平均卵巢增幅为42.57±23.18,而处理2和处理3的平均卵巢增幅分别为22.94±7.97和12.91±18.68;处理2的平均卵巢增幅大于处理3,但差异不明显(P>0.05)。处理2的平均黄体数大于处理1和处理3(分别为8.5、7.5和7.2),但差异不明显(P>0.05);平均卵泡数处理1大于处理2和处理3(分别为2.1、0.3和0.2),并且处理1和处理2、处理3差异显著(P<0.05);处理1的胚胎回收率低于处理2和处理3(分别为45%、86%和81%),且差异显著(P<0.05);胚胎的有效率三组中以处理3最高,为80%,处理2和处理1的较低,分别为75%和60%。但差异不显著(P>0.05)。结果表明:①作为高产奶牛的超数排卵方案,CIDR+pFSH(CA)+PG(A)法并不能取得较为理想的超排效果。广泛应用于猪的同期发情的PG-600(A),并不能使奶牛取得同期发情效果;②pFSH(C)(中国科学院动物研究所),应用于奶牛的超数排卵,能获得令人满意的超排效果。与pFSH(CA)(加拿大产)相比,超排结果无较大差异;③CIDR+氯前列烯醇是一个较为稳定的奶牛同期发情方案,无论在处理前卵巢处于何种状态,都能使其在预定的时段内发情,可以在大批量的胚胎工厂化生产中应用,以减少人力、物力消耗;④冲胚前卵巢上有腔卵泡的存在,直接影响胚胎的回收率。其原因还需进一步的研究探讨。 在对奶牛囊胚和桑椹胚不同冷冻保存方法的比较研究中发现:采用常规冷冻法,乙二醇处理组的囊胚回收率最高(为100%);形态正常率也明显高于甘油组和One Step-freezing组(分别为90%,85.7%和87.5%);甘油组的形态正常率最低(85.7%),但差异均不显著(P>0.05)。乙二醇处理组的继续发育率高于甘油组和One Step-freezing组(分别为88.8%,83.6%和66.6%),但差异不显著。玻璃化冷冻处理组的囊胚解冻后,形态正常率和继续发育率都低于常规冷冻组(分别为71.4%和40%)。与乙二醇处理组相比,玻璃化保护液的继续发育率远低于乙二醇组(分别为40%和88.8%),差异显著(P<0.05)。桑椹胚解冻后,形态正常率在One Step-Freezing处理组和乙二醇处理组无差别,均为80%,甘油 组较低,仅为66.6%。玻璃化冷冻解冻后桑堪胚的形态完好率低于常规冷冻的各 处理组,但差异不显著。继续发育率乙二醇组和甘油组无差别,而以one steP一Freezing处理组最低,在常规冷冻处理组中乙二醇和甘油最高(75%),而 One SteP一17reezing处理组最低(50%)。玻璃化处理组高于常规组的One steP一Freezing处理组,低于甘油组和乙二醇组,但差异不显著(P0.05)。结果 表明:①商业化的胚胎移植相关产品One steP一freezing作为常规冷冻保护剂,对 奶牛胚胎有较好的保护效果,并能大大的简化胚胎移植的程序;②由于乙二醇的 高渗透性和低毒性的特点,1.smol/L乙二醇+蔗糖对奶牛体内生产的胚胎有很好 的保护效果,常规冷冻时保护率远远大于10%甘油对胚胎的保护率;③与One SteP一freezing冷冻保护剂相比,乙二醇价廉易得,并且保护效果优于One steP一freezirlg保护剂,是商业化胚胎移植技术推广的首选冷冻保护剂;④40%乙 二醇+20%PVP的玻璃化保护液,对体内生产的奶牛胚胎一定的保护作用,并且 对桑堪胚的保护效果优于囊胚。与常规冷冻法相比,其可大大简化胚胎冷冻的程 序和节省冷冻所需时间,虽然保护率从本次试验结果来看低于常规冷冻法,但通 过对冷冻液浓度、平衡时间、平衡温度剂解冻液浓度、解冻稳定的进一步摸索, 玻璃化冷冻法有很好的发展前景。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S823.3

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