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《甘肃农业大学》 2003年
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猕猴体外受精的研究

陈永昌  
【摘要】: 为了建立行之有效的猕猴体外受精—胚胎移植技术方案,对上海动物园的5只雄性猕猴进行了精液采集及其品质分析实验。自行设计了超数排卵方案,并利用国产兽用促性腺激素刺激15只猕猴超数排卵,手术法采集卵母细胞,然后选择高品质的精液,经过液化、优选、精子获能后对体内或体外成熟的卵母细胞进行体外受精,并将发育到8-细胞期的胚胎冷冻保存。2003年3月将其中3枚解冻后移植给1只处于月经周期第15d的受体猕猴。实验结果如下: 1.阴茎刺激时采精量显著高于直肠刺激(P<0.01),直肠灌肠刺激时,精子密度和活率与阴茎刺激时差异不显著(P>0.05),不灌肠时,精液量、精子密度和活率极显著降低,深度麻醉时,采精成功率明显降低。1%α-胰凝乳蛋白酶可使40%以上的猕猴精液凝块液化,加入稀释液后,液化率更高,但精液品质下降。 2.用四种方案超数排卵时,C、D方案均可获得20枚以上的卵母细胞;用1500 IU的HCG可使53.6%的卵母细胞成熟至MⅡ期;当采卵时间延迟到HCG后34h时,46%的卵母细胞成熟至MⅡ期。 3.上游法和Percoll法均能显著提高精子形态正常率(68±10至82±7和84±6)和精子活率(72±11至85±6和83±9),但受精率差异不显著(P>0.05);体外受精实验中共用了136枚卵母细胞,其中30枚在精子获能实验中老化受损,其余106枚受精56枚,6枚进行固定,其余50枚用于体外发育培养,共获得28枚卵裂胚,11枚发育为8-细胞期胚胎。冷冻保存一段时间后解冻了其中3枚,存活率为100%,移植后没有妊娠。 结果表明: 1.灌肠可以明显提高直肠刺激的成功率;阴茎刺激效果优于直肠刺激;轻度麻醉更有利于精液采集;精液可以采用物理和化学方法处理使其部分液化。 2.C、D方案取得了较好的超排效果;HCG对卵母细胞的成熟至关重要;随着采卵时间的延迟,卵母细胞的成熟程度升高;1月份和2月份的超排效果最好。 3.上游法和percoll法都是有效的精子优选法,对受精率的影响基本无差异;咖啡因和dbcAMP在精子体外获能时缺一不可;理想的受精密度应在2×10~5精子/ml左右;在使超数排卵后采集的卵母细胞进一步成熟时,血清和激素的添加会取得更好结果;在胚胎的发育过程中,血清和氨基酸都是必要的能量物质。 4.胚胎冷冻保存后的解冻存活率很高,移植后没有受孕受多种因素的影响。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S663.4

【参考文献】
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