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牦牛胎盘发生过程中细胞凋亡及其通路的研究

雍艳红  
【摘要】:为了阐明:(1)牦牛胎盘的发生模式及其所属类型、相关细胞的变化规律,(2)牦牛胎盘发生过程中子宫内膜细胞(EC)和胎儿滋养层细胞(TC)凋亡的变化规律,(3)细胞增殖因子Ki-67在牦牛胎盘发生过程中的表达特性,(4)胎盘发生过程中凋亡相关蛋白Fas/FasL、TNFα/TRADD、Bcl-2/Bax、caspase-3、caspase-9的表达特征,推测胎盘细胞凋亡的可能通路,本研究选用青海大通种牛场成年健康母牦牛20头进行了以下实验并取得了相应的结果:(1)采集妊娠26—45日的牦牛子宫,通过子宫中动脉灌注多聚甲醛后,采取胎儿附着部位的子宫组织,分别进行光镜、透射电子显微镜和扫描电子显微镜的观察。发现牦牛胎盘发生开始于妊娠28日左右,以子宫内膜上皮下陷或外突形成隐窝,而滋养层发生相应的结构变化与子宫内膜形成镶嵌结构,以及内衬滋养层的胚外结缔组织血管化为标志。牦牛胎盘发生过程中可见滋养层双核细胞或多核巨细胞向子宫内膜迁移,并通过直接插入或与子宫内膜上皮细胞相互融合形成母体双核或多核巨细胞;子宫内膜基膜下血管呈网状,分布密集。妊娠28日的滋养层中出现血管以及有核的幼稚红细胞,到妊娠34日,可见子体血管在母胎界面上形成明显的血管压迹;妊娠45日,子宫内膜的隐窝已产生分支。综合HE染色、透射电镜和扫描电镜的观察结果,确定牦牛的胎盘为上皮绒毛膜型。(2)运用HE染色、透射电镜、原位荧光标记(DAPI)以及DNA原位末端标记(Tunel)检测结果表明,牦牛胎盘发生的各阶段均存在凋亡的细胞,子宫内膜上皮细胞、基质细胞、腺上皮细胞、母体血管内皮细胞以及滋养层细胞、子体血管内皮细胞均可发生凋亡。凋亡的形式基本相同。HE染色观察可见凋亡细胞胞核固缩碎裂、呈蓝黑色、胞浆呈淡红色,可形成凋亡小体;透射电镜下凋亡细胞核染色质的形态学改变有以下几种:细胞核呈波纹状或呈折缝样,部分染色质呈浓缩状态,出现许多空泡结构;细胞核染色质高度凝聚、边缘化;细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。DAPI检测结果:凋亡细胞的核缩小、致密,发散高亮的蓝色荧光,主要变化为:核呈蓝色的波纹状或呈折缝样,细胞浆中或有稀疏亮点;核染色质在核膜下方呈强烈的蓝色荧光;凋亡小体呈细小的蓝色荧光颗粒。Tunel的检测结果证实,普通光学显微镜下凋亡的细胞呈棕黄色,荧光显微镜下呈高亮的绿色荧光。在牦牛胎盘发生过程中,子宫内膜上皮细胞的凋亡率有增高趋势,到妊娠的34天达峰值,为30.63%。随后缓慢下降。滋养层细胞的凋亡率变化不明显。就细胞类型来说,在牦牛胎盘发生过程中的胎儿侧,滋养巨细胞凋亡较为多见。而子宫内膜中主要是上皮细胞和血管内皮细胞发生凋亡。


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