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《甘肃农业大学》 2007年
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山蚂蝗属植物种质资源的AFLP分析

王春梅  
【摘要】: 本研究采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术,对山蚂蝗属植物的5个国内种和2个引进种共计46份材料进行了遗传多样性和亲缘关系的分析。主要研究结果如下: 1.确定了适于AFLP分析的山蚂蝗属植物基因组DNA提取方法为改进SDS法,其提取液成份为100mmol/L Tris-Cl (pH8.0);50mmol/L EDTANa2 (pH8.0); NaCl 500mmol/L; 1.25% SDS,2%PVP40,β-Mercaptoethanol 10mmol/L(用前加入)。通过这种方法,得到了基本无降解,蛋白质、多糖和RNA去除彻底,质量好的山蚂蝗属植物基因组DNA。结果表明改进的SDS法提取出来的基因组DNA适合AFLP分析。 2.建立了适合山蚂蝗属植物的AFLP银染技术体系:在25μL酶切体系中(所有试剂均来自北京鼎国生物技术公司试剂盒),包括基因组DNA 200ng,10×Reaction buffer 2.5μL,EcoR?/Mse? 2μL加水至25μL;37℃酶切8h;加上接头,18℃连接10h(或过夜);连接产物直接进行预扩增;预扩增产物稀释50倍进行选择性扩增;加入10μL Loading Buffer。95℃变性5min,立即冰浴;在6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上进行电泳分析;银染法检测PCR物。 3.采用2对引物组合对46个供试材料进行扩增分析, 2对引物共扩增出172条谱带,平均每对引物能扩增出86条谱带。E-AAC/M-CAA有7条共带,E-AAG/M-CAA有11条共带,占其余带的10.47%,其他154条均为多态性带,多态性检出率为89.53%。 4.采用NTSYS对供试材料的AFLP数据结果进行聚类分析,将46个供试材料分为6类。 5.应用AFLP技术进行山蚂蝗属植物种质资源的遗传多样性分析,从分子水平探讨了部分山蚂蝗属植物的亲缘关系。 6.从分子水平讨论了两个引进种在中国植物志分类体系中的可能位置。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S54

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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