西瓜杂种一代种子纯度SSR鉴定的研究

【摘要】： 目前,西瓜杂种一代品种已广泛应用于生产。但在人工制种过程中,由于隔离不严或人工取雄不及时、不完善、不彻底等原因,常混有母本自交系或其他种子等假杂种给农业生产造成损失。因此,杂交种种子在包装销售前必须通过纯度检测。 本研究使用SSR分子标记方法对西瓜杂交一代品系(XY-1)进行了种子纯度鉴定研究,结论如下: 1)本试验以完全展平的西瓜子叶为研究材料,采用CTAB法提取细胞总DNA。实验证明用CTAB法所得DNA产率和纯度都较高,片段较大,适宜做SSR分析。 2)通过试验,确定了适合西瓜的最佳PCR反应成分(包括dNTP、引物、DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶等的浓度组合),并通过对变性、退火、延伸时间,退火温度和循环次数等参数的优化,确定了相对比较省时有效的扩增程序,最终得到了一个重复性好、清晰度高、比较理想的SSR-PCR扩增体系。 3)本试验经过多次尝试,发现硝酸银染色时间、染色后漂洗时间以及显影时间和温度,玻璃板处理情况,PCR产物上样量以及电压高低等因素都会对其造成很大的影响。经过改善各种条件后聚丙烯酰胺电泳条带完整,清晰,易于观察记录,准确度较高。未经过改变条件的聚丙烯酰胺电泳条带发虚,弯曲,背景较深,有干扰带,条带连在一起。在进行SSR分析时,误差较大,使结果变得不准确。 4)利用20对引物对西瓜杂种一代品系(XY-1)进SSR标记,并从中筛选出1对适合做上述品种种子纯度鉴定的具有多态性引物。用该引物对100粒F1代种子进行了纯度鉴定,结果显示其纯度是97%。