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《甘肃农业大学》 2009年
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TSOL18基因的克隆及其表达产物的抗原性与毒性研究

刘立军  
【摘要】: 猪囊虫病(Cysticercosis cellulosae)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫—猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)感染猪或人而引起的人畜共患寄生虫病。是公认的经济病之一。该病在我国流行广泛,严重危害人体健康,并制约着养猪业发展,因此有效预防控制和诊断猪囊虫病是世界各国普遍关注的焦点。 本研究从孵化并激活的猪带绦虫六钩蚴提取总RNA,利用RT-PCR技术成功克隆到猪带绦虫六钩蚴疫苗侯选基因Tsol18基因,构建原核表达载体。为明确Tsol18重组抗原免疫小鼠后的抗体消长情况,将构建的原核表达载体pGEX-4T-Tsol18进行了大量诱导表达,表达产物用琼脂糖凝胶FF柱进行了纯化,采用SDS-PAGE和Western blot分别进行了GST-Tsol18重组蛋白的纯度和活性分析;纯化后的重组蛋白经皮下接种免疫BALB/c小鼠,用ELISA法对免疫后不同时间的小鼠血清进行了测定。结果显示,GST-Tsol18重组蛋白主要以可溶性形式表达;可以被猪囊尾蚴阳性血清识别,ELISA检测结果显示在免疫后第7d能够检测到相应的抗体,由于免疫剂量不同,在免疫后各组抗体水平的峰值出现的时间不同,但都集中在第28~49d,表明GST-Tsol18重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。 对接种免疫的BALB/c小鼠进行临床观察,并在不同时间采集小鼠的的内脏器官和接种部位的肌肉组织,通过HE染色镜检,除接种部位肌肉组织在接种初期出现少量炎症外,未发现明显的病理变化,临床观察未见小鼠异常反应和变化。说明该重组抗原对小鼠无毒害作用。可以作为猪囊虫病的诊断抗原和疫苗侯选抗原。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S858.28

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【参考文献】
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