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《甘肃中医药大学》 2018年
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金黄色葡萄球菌表面蛋白表达基因ebh分子流行特征及致病性研究

李可可  
【摘要】:目的:了解金黄色葡萄球菌表面蛋白表达基因ebh在兰州地区分离株中的分布,同时探究该基因对细菌耐药性、生物膜、致病性及与克隆株播散中关系。为进一步研究该表面蛋白提供有价值的研究数据及信息。方法:收集甘肃省人民医院2016年12月-2017年7月各类临床标本分离出的金黄色葡萄球菌,随机筛选84株菌株,采用纸片扩散法(K-B法)测定药物敏感性;用PCR检测mecA基因;随机选取mec A基因阳性及阴性菌株各24株,以及收集12株健康人群分离株,对所有菌株ebh基因进行PCR扩增,将阳性扩增产物测序与在线数据库进行比对;使用刚果红培养基对金黄色葡萄球菌实验菌株生物膜进行检测;测试ebh基因阳性菌株与阴性菌株在人血清中凝聚率的变化;应用MALDI-TOF MS飞行质谱仪对ebh阳性株及阴性株的主要蛋白特征进行建树,确定菌株的流行情况及之间的亲缘关系。结果:1.临床分离的84株金黄色葡萄球菌药敏结果显示,所有菌株对大部分抗菌药物都存在不同程度的耐药。药敏纸片法初步筛选出对头孢西丁耐药的菌株39株,表型法判定为MRSA的检出率为46.4%。2.利用PCR对84株菌株的mec A基因进行检测,结果显示mecA基因阳性率为53.6%(45/84);选取经PCR鉴定的MRSA株及MSSA株各24株,检出ebh阳性检出率为39.6%(19/48),其中MRSA株中,阳性率为45.8%(11/24);MSSA株中阳性率为33.3%(8/24)。MRSA和MSSA阳性携带率无显著性差异(P0.05)。3.分别对ebh基因阳性MRSA株及ebh基因阴性株进行刚果红培养基培养进行产生物膜的筛选,其中19株ebh基因阳性株产生物膜株数为17株,11株ebh基因阴性株产生物膜株数为4株。4.人血浆凝集实验表明ebh阳性菌株较阴性菌株能更好的在人血浆中产生聚集,从而产生更强的致病性。5.对ebh阳性株及阴性株利用MALDI-TOF MS进行生物学分型表明,ebh阳性株之间有较好的亲缘型。结论:1.金黄色葡萄球菌ebh基因产物可能是其毒力因子之一,但在其在MRSA与MSSA中携带率无统计学差异。2.ebh基因可能与生物膜的产生的关系尚无法确定。3.ebh基因可能在人血流感染中发挥重要作用。4.MALDI-TOF MS飞行质谱仪进行生物学分型揭示兰州地区金黄色葡萄球菌变化规律,为进一步研究甘肃省金葡分离株的进化规律提供了有效数据和基础信息。
【学位授予单位】:甘肃中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R446.5

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【参考文献】
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