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《新疆大学》 2005年
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人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1 DNA疫苗的研究

王艳萍  
【摘要】:人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1 DNA疫苗的研究 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种重要的致瘤DNA病毒,可引起人生殖道、肛门皮肤和粘膜产生肿瘤。HPV在宫颈癌发生过程中起着重要的作用,在HPV各型中,与宫颈癌发病关系密切的有HPV-16、HPV-18等,在80~90%的宫颈癌组织中可检测到HPV-16和/或HPV-18的存在,HPV-16和HPV-18被认为是妇女宫颈癌的主要病原。目前,临床上尚无预防HPV16感染的措施,中晚期宫颈癌的化疗和手术治疗效果也不理想,因此,研制高效、安全、廉价的疫苗预防HPV感染有着十分重要的意义。由于HPV仅存生于终末分化的上皮组织中,含量很少,缺乏体外培养系统,使HPV减毒疫苗和灭活疫苗的研制难以进行。随着分子生物学的发展和基因工程技术的成熟,HPV疫苗的研究得以快速发展。HPV16L1基因编码病毒的主要衣壳蛋白能诱导产生病毒中和抗体,且L1基因表达后能自发组装成与天然病毒颗粒相似的病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),是HPV16预防性疫苗的主要候选抗原。 新疆南部维吾尔族聚居区是宫颈癌的高发区,在前期的研究中,我们已经从新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中获得HPV16L1基因,该基因发生多位点变异,这些突变引起HPV16L1蛋白疏水性和抗原性的改变,以新疆地区宫颈癌患者组织中HPV16L1基因开展疫苗研究,对预防HPV16新疆流行株的感染将更为有效。本研究是在此基础上开展HPV16L DNA疫苗方面的研究,内容包括:HPV16L1基因在大肠杆菌中的表达及免疫检测;HPV16L1基因疫苗的构建及其免疫效果的检测;同时,从新疆维吾尔妇女宫颈癌组织中克隆了转录因子Skn-la的cDNA,并对其表达进行初步探索。 为得到检测HPV16L1抗体所需的抗原蛋白,构建了pGEX4T-1/HPV16L1原核表达质粒,重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG诱导外源基因表达,用SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定和分析。该质粒在大肠杆菌中表达出分子量约为82kDa的蛋白,该蛋白能与HPV16L1抗体发生特异性反应。 DNA疫苗具有诸多优点,但其与传统疫苗相比,其免疫效价还比较低。研究中构建了HPV16L1基因的三种疫苗质粒,将HPV16L1基因直接克隆到真核表达质粒pcDNA3.0上获得pcDNA3/HPV16L1疫苗质粒;为增强HPV16L1 DNA疫苗的免疫效果,
【学位授予单位】:新疆大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

【参考文献】
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