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牙釉质基因鉴定山羊早期胚胎性别的研究

唐纪伟  
【摘要】:山羊的牙釉质(AMEL)基因定位于X和Y染色体上的同源区,根据AMEL基因在X和Y染色体同源区上存在不同程度碱基缺失的特点,设计巢式引物,就PCR引物准确性检测、超微量DNA鉴定方法的建立、胚胎DNA扩增及鲜胚移植等方面进行了研究,旨在利用巢式PCR扩增AMEL基因建立一种早期胚胎性别鉴定的方法。研究结果如下: 1.对AMEL基因巢式引物的内引物和外引物分别扩增山羊血液基因组DNA,经1.5%的琼脂糖凝胶电泳、EB染色,外引物经扩增后雌性山羊只得到一条349 bp的来自X染色体的扩增条带,而雄性山羊能得到一条源自X染色体的349 bp的扩增条带和一条源自Y染色体的289 bp的扩增条带。内引物经扩增后雌性山羊只得到一条311 bp的来自X染色体的扩增条带,而雄性山羊能得到一条源自X染色体的311 bp的扩增条带和一条源自Y染色体的251 bp的扩增条带。46个山羊血液DNA样本(22F,24M)经性别鉴定后与实际性别比较,准确率为100%(22F/22F,24M/24M)。 2.对6只山羊(3F,3M)10 pg量血液基因组DNA(约3个细胞)进行巢式PCR扩增,雌性山羊只得到一条来自X染色体的扩增条带,而雄性山羊能得到一条源自X染色体的扩增条带和一条源自Y染色体的扩增条带。 3.利用超数排卵技术获得86枚可用胚胎,36枚胚胎用于性别鉴定,33枚有扩增结果,雌雄性别比为16F/17M;50枚胚胎移植给50只受体山羊,产羔27只,胚胎移植妊娠率为54%(27/50),雌雄比为12F/15M。胚胎性别鉴定的雌雄性别比率与胚胎移植后产羔性别比率无明显差异(P0.05)。


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