收藏本站
《新疆农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB、3A的克隆表达及3A蛋白间接ELISA方法的初步建立

张先锋  
【摘要】:口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害猪、牛、羊等偶蹄类动物。该病传播速度快、宿主范围广、发病率高,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病之首。多数发展中国家通过注射疫苗的办法来控制该病的流行,因此如何区分自然感染动物和注射疫苗动物是该病防控中迫切解决的问题。FMDV感染动物既能产生结构蛋白(SP)抗体也能产生非结构蛋白(NSP)抗体,而现行灭活疫苗在生产过程中大多数去除了非结构蛋白,因此,动物在接种FMDV灭活疫苗后,主要产生结构蛋白抗体,很少或者不产生NSP抗体。所以,以NSP为抗原,检测动物体内NSP抗体是一种很好的区分自然感染动物和疫苗免疫动物的诊断方法。 本文以亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒为研究对象,通过逆转录并进行PCR扩增得到非结构蛋白3ABC基因,然后定向克隆到原核表达载体pET-32a,重组质粒pET-32a-3ABC转化宿主菌BL21和rosetta,并经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测,证明重组蛋白PET-32a-3ABC成功在大肠杆菌中表达。表达量较少,经过对3ABC序列进行分析,发现含有的稀有密码子较多,约占总数的30%,可能影响蛋白的表达。以构建的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC质粒pET-32a-3ABC为模板,设计特异性的引物,然后进行PCR扩增得到非结构蛋白3AB、3A基因,然后分别定向克隆到原核表达载体pET-28a、pET-41a两种载体上,将重组质粒转化宿主菌BL21,并经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测,证明重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达产物经Western blot分析具有免疫原性。 本文用纯化3A蛋白作为抗原,建立了检测FMDV抗体的间接ELISA方法并确定了ELISA最佳工作条件。此项研究为以FMDV非结构蛋白为抗原,建立鉴别诊断动物自然感染和免疫的间接ELISA方法奠定了基础。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 骆继怀;杨利恒;高闪电;独军政;常惠芸;薛慧文;;口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析[J];甘肃农业大学学报;2012年03期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王建东;郭建宏;杨春生;刘在新;;基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展[J];动物医学进展;2007年S1期
2 祝秀梅;卢曾军;胡永浩;曹轶梅;马江涛;刘在新;;检测猪血清口蹄疫病毒非结构蛋白3AB抗体ELISA方法的建立[J];甘肃农业大学学报;2008年01期
3 石军,陈安国,洪奇华;DNA疫苗在动物医学中的应用研究进展[J];中国畜牧兽医;2002年05期
4 王莉娟,徐天刚,赵云玲,陆明哲,陈义平,曹洪敬,蔡丽娟;口蹄疫诊断技术研究进展[J];中国畜牧兽医;2005年03期
5 罗鸣;潘琼;阙晓南;;口蹄疫新型疫苗的研究进展[J];广西畜牧兽医;2009年02期
6 索青利;赵明秋;琚春梅;陈金顶;王伟利;陈立军;;口蹄疫病毒VP1与3ABC基因片段的克隆及表达[J];华南农业大学学报;2008年01期
7 金宁一,张洪勇,尹革芬,郑敏,刘彤,江文正,李子健;共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性[J];科学通报;2004年06期
8 戴亚斌,陈德胜,丁铲,潘杰彦,刘兴友,芦银华,刘梅,陈溥言,蔡宝祥;表达鸡传染性支气管炎病毒SD/97/01株S1蛋白的重组杆状病毒的构建[J];厦门大学学报(自然科学版);2002年04期
9 董志强;张志;李晓成;陈德坤;洪军;张燕霞;黄保续;;口蹄疫检测技术研究进展[J];中国动物检疫;2007年03期
10 张永光;王永录;蒋守田;方玉珍;魏怀禄;况乾惕;;牛O-A型口蹄疫双价灭活苗研究——疫苗制备及其安全效力试验[J];中国兽医科技;1996年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 付薇;陈磊;熊毅;潘琼;王常伟;陈进喜;胡晓静;刘棋;;O型口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1的克隆与原核表达[J];安徽农业科学;2008年35期
2 杨生海;殷宏;张杰;刘永生;张继乐;曾巧英;陈豪泰;马丽娜;马艳平;丁耀忠;;C型口蹄疫病毒VPI基因的克隆及真核表达载体的构建[J];安徽农业科学;2009年10期
3 孙靖;向华;靳野;蔡建平;王贵平;尚佑军;宣华;刘湘涛;;口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的表达及反应原性鉴定[J];安徽农业科学;2009年14期
4 窦鹏勋;葛建强;张勇;杨增歧;韩斌;贾燕青;冯磊;南风;白永平;张红梅;雷祥前;;3种疫苗单独和联合免疫对猪抗体水平的影响[J];安徽农业科学;2009年31期
5 胡春芃;徐振山;宋礼华;;抗体芯片技术在卵巢癌诊断中的应用进展[J];安徽医药;2009年08期
6 刘颖;冉多良;马扬;;正向间接血凝试验监测家畜O型口蹄疫抗体[J];现代农业科技;2007年19期
7 高飞;孙国斌;张金凤;;国外口蹄疫流行现状分析及防治策略[J];北京农学院学报;2006年01期
8 丛艳君;任发政;云战友;;β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别[J];北京工商大学学报(自然科学版);2010年04期
9 丁建英;韩剑众;顾春海;冯志梅;;基于聚硫堇的一次性O型口蹄疫抗原酶免疫传感器的研制[J];传感技术学报;2010年12期
10 徐岩;贡成良;薛仁宇;沈卫德;曹广力;;人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达[J];常熟理工学院学报;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 郑敏;金宁一;张洪勇;李昌;田明尧;马鸣潇;贾雷立;;口蹄疫重组鸡痘病毒和DNA疫苗的豚鼠免疫保护试验研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 詹爱军;覃健萍;刘忆云;马静云;曹永长;毕英佐;;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的基因克隆与序列测定[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
3 杨苏珍;卢曾军;曹轶梅;李冬;贾宁;刘在新;;感染动物口蹄疫病毒3ABC抗体的变化规律[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
4 陈瑞爱;裴仉福;吴德铭;冼文标;李群芳;;猪O型口蹄疫BEI灭活疫苗免疫程序的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
5 董金杰;祁光宇;刘学荣;乔莉萍;安芳兰;董文教;武发菊;陈苗苗;常艳燕;刘力宽;牟克斌;黄银君;;用蔗糖密度梯度离心法检测与定量口蹄疫病毒抗原[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡珊;荧光共振能量转移体系的研究及其在均相免疫分析中的应用[D];华中科技大学;2010年
2 杜少卿;硒蛋白S和硒蛋白K在内质网应激中的调节作用[D];华中科技大学;2010年
3 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年
4 刘子泉;人源S100A1和S100B全基因合成、表达、单抗制备及其活性分析[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
5 施婉君;2种蜜蜂和4种胡蜂溶血肽基因克隆与表达研究[D];浙江大学;2003年
6 丁剑冰;新疆细粒棘球蚴95抗原基因疫苗的免疫保护作用及其机制的研究[D];新疆医科大学;2003年
7 张春秀;基于抗原/抗体反应的生物检测技术及其应用研究[D];东南大学;2003年
8 史喜菊;牛IFN-α/γ基因的克隆、表达及重组蛋白的应用研究[D];中国农业大学;2004年
9 郑大勇;完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究[D];第一军医大学;2004年
10 师晓栋;玫瑰无须鲃卵黄蛋白原和卵黄脂磷蛋白的纯化、鉴定、免疫分析和功能研究[D];中国海洋大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曲丽洁;用于动物性食品中莱克多巴胺快速检测的SPR技术研究[D];华中农业大学;2010年
2 费晶晶;两个家蚕FKBP12基因的研究[D];浙江理工大学;2010年
3 张学芳;家蚕Bmphb基因的表达及其功能初步研究[D];浙江理工大学;2010年
4 朱立明;家蚕TRAPα基因的表达与功能分析[D];浙江理工大学;2010年
5 杨光;家蚕BYB基因的表达及其功能分析[D];浙江理工大学;2010年
6 林雪;蛋白A的重组表达及重组菌的发酵过程优化[D];大连理工大学;2010年
7 王骏俊;鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定[D];安徽农业大学;2010年
8 高琳琳;羊口蹄疫灭活疫苗免疫程序的研究[D];中国农业科学院;2010年
9 王若;口蹄疫病毒结构蛋白VP4基因的真核表达[D];河北农业大学;2010年
10 刘蓉;抗黄曲霉毒素B_1荧光重组抗体的制备[D];江南大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 杜平;尚佑军;贺延玉;孙晓林;马军武;;口蹄疫病毒3D基因的克隆及其编码蛋白的结构和功能预测[J];甘肃农业大学学报;2009年02期
2 宋玲玲;王洪梅;李瑞国;高运东;武建明;刘晓;何洪彬;;口蹄疫病毒感染机理及防控策略的研究进展[J];家畜生态学报;2010年04期
3 韩雪清;刘湘涛;林祥梅;尹双辉;尚佑军;刘健;梅林;;口蹄疫病毒3D蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析[J];微生物学杂志;2005年05期
4 付元芳;卢曾军;曹轶梅;郭建宏;张小丽;田美娜;刘在新;才学鹏;;口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测[J];微生物学报;2008年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 蔡利军;口蹄疫非结构蛋白3ABC单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张礼璧;ELISA法应用于诊断病毒学的进展[J];病毒学报;1988年01期
2 刘在新,赵启祖,刘卫,周鹏程,朱彩珠,常慧芸,谢庆阁;6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析[J];病毒学报;1998年01期
3 彭贵青,陈焕春,钱平;口蹄疫诊断技术研究进展[J];动物医学进展;2003年06期
4 杨志军,林焱,李光金,严维耀,徐泉兴,尤永进,郑兆鑫;含T细胞表位和B细胞表位的抗O型FMDV基因工程疫苗诱导豚鼠产生免疫反应[J];复旦学报(自然科学版);2000年05期
5 陈志;曾照芳;;基因芯片技术的最新进展[J];国际检验医学杂志;2006年03期
6 杨林;廖明;;动物疫病基因芯片诊断技术的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2006年09期
7 潘洁;陈波;邢继兰;饶忠;徐泉兴;尤永进;;口蹄疫病毒3AB试剂盒的检测及比较[J];上海农业学报;2006年02期
8 韦 婷 ,郑 敏 ,刘 棋,李雪梅,李铁征,张洪勇 ,郭志儒 ,夏志平 ,金宁一;口蹄疫病毒衣壳蛋自前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析[J];中国生物制品学杂志;2002年03期
9 吴斌;许锦文;王米渠;;试论cDNA表达谱芯片实验的影响因素[J];现代中西医结合杂志;2006年18期
10 江鹏斐,刘在新,赵启祖,常惠芸,谢庆阁;口蹄疫病毒2c基因的克隆及表达[J];畜牧兽医学报;2001年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张润祥;高明春;曲哲会;李爽;曹永生;宋军;宋鸽;刘丹丹;王君伟;;牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立[J];中国预防兽医学报;2010年02期
2 张昱;王永录;张永光;方玉珍;潘丽;蒋守田;吕建亮;刘力宽;张中旺;张淑刚;李正丰;杜进鑫;;口蹄疫病毒结构蛋白VP1上B细胞表位的筛选鉴定[J];华北农学报;2009年05期
3 曹倩倩;廖德芳;李华春;;利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因研究进展[J];中国畜牧兽医;2009年10期
4 郑敏,金宁一,鲁会军,韩松,李昌,金扩世;C型口蹄疫病毒VP1基因的串联与原核表达[J];中国生物制品学杂志;2005年05期
5 李云峰,达来,孙薛蔚,谢秀杰,江晓勇;口蹄疫病毒抗原表位的编码序列在大肠杆菌中表达[J];内蒙古大学学报(自然科学版);2002年03期
6 陈祖欢,张洪英,郭瀛军,林懿,朱维佳,孙树汉;口蹄疫病毒融合表位基因在pET原核系统的高表达及产物的纯化[J];第二军医大学学报;2003年08期
7 鄢庆枇,方恩华,苏永全,王军,庄峙厦;大黄鱼溶藻弧菌LPS的间接ELISA检测[J];台湾海峡;2004年01期
8 田纯见,曹永长,毕英佐;口蹄疫病毒泛亚株全衣壳基因克隆和序列结构分析[J];华南农业大学学报(自然科学版);2004年02期
9 李明,何孔旺,陆承平;检测两种猪源链球菌抗体间接ELISA方法的筛选与应用[J];中国人兽共患病杂志;2005年10期
10 杜以军,姜平,杨晓玮,汤景元,李玉峰,李永东;猪口蹄疫病毒多抗原表位重组腺病毒的构建与鉴定[J];中国病毒学;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨鑫;王红宁;周英顺;高荣;曾博;徐昌文;丁梦蝶;;猪源O型口蹄疫病毒分离株VP1基因特征分析[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
2 邬苏晓;刘镇明;罗满林;戚一达;;口蹄疫病毒3ABC基因的原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
3 田明尧;金宁一;李昌;郑敏;秦晓冰;;FMDV VP1基因在大肠杆菌中的表达及应用研究[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
4 邱杨;肖性龙;刘建丽;李惠芳;张经纬;余以刚;吴晖;;口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
5 潘群兴;王永山;何孔旺;欧阳伟;王晓丽;诸玉梅;夏兴霞;;重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
6 李夏莹;王建昌;郑世军;;口蹄疫病毒VP1,2C蛋白与宿主细胞相互作用机制的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒RNA组成、功能及分子致病机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
8 鲁会军;韩松;郑敏;贾雷立;王凯;金宁一;;口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
9 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒分子流行病学的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
10 郑敏;金宁一;张洪勇;刘棋;韦婷;郭建刚;李华明;尹革芬;鲁会军;;口蹄疫病毒O/NYOO株的分子生物学特性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 江南雪舞;谈谈口蹄疫病毒[N];大众卫生报;2005年
2 吴星;口蹄疫对农产品市场的影响[N];期货日报;2005年
3 廖学时;构建感染性口蹄疫病毒粒子成功[N];医药导报(中药报);2004年
4 河北省畜牧兽医站 韩庆安(高级兽医师);春防牲畜口蹄疫[N];河北科技报;2006年
5 罗学宏;“手足口病”不是“口蹄疫”[N];家庭医生报;2007年
6 本报记者 刘丁;口蹄疫阴影下的“英国病人”[N];华夏时报;2007年
7 ;猪口蹄疫病的诊治[N];中国畜牧兽医报;2008年
8 刘书梅;春季应做好猪口蹄疫的防治工作[N];河南科技报;2007年
9 刘晔;“山羊绒洗净因素对口蹄疫病毒影响”通过鉴定[N];中国国门时报;2008年
10 郭林;口蹄疫扩大:欧盟对英出口亮红灯[N];光明日报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李勇;口蹄疫病毒3C(D)蛋白与宿主细胞因子Fascin-1相互作用研究[D];武汉大学;2010年
2 孙萌;口蹄疫病毒VP1抗原基因在模式植物叶绿体中的重组和表达[D];浙江大学;2003年
3 吴雨霞;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在原核和真核细胞中的表达[D];甘肃农业大学;2003年
4 朱远茂;表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组牛疱疹病毒1型的构建及其免疫研究[D];东北农业大学;2010年
5 邵寒娟;A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D];厦门大学;2004年
6 白兴文;我国O型泛亚1系口蹄疫病毒表型差异的分子基础[D];中国农业科学院;2012年
7 陈义平;猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的高效可溶性表达和检测血清抗体的间接ELISA方法的建立[D];扬州大学;2003年
8 洪琦;口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2005年
9 潘丽;口蹄疫病毒免疫原基因在番茄和拟南芥中的表达及转基因番茄动物免疫试验[D];中国农业科学院;2005年
10 金明兰;口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张先锋;口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB、3A的克隆表达及3A蛋白间接ELISA方法的初步建立[D];新疆农业大学;2010年
2 王冰;口蹄疫病毒3ABC-ELISA诊断方法的建立[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
3 裴志花;牛O型口蹄疫病毒内蒙古疫苗株p1基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2005年
4 郭设平;牛结核病多重组抗原间接ELISA试剂盒的研制及应用[D];中国农业科学院;2006年
5 白如念;鸡传染性法氏囊病间接ELISA抗体检测试剂盒的研究[D];中国农业大学;2004年
6 张玲妮;猪链球菌2型MRP单克隆抗体的制备及血清抗体的检测[D];南京农业大学;2004年
7 楼朝平;Cullin-5蛋白单克隆抗体的制备[D];吉林大学;2007年
8 方钦;间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌抗体方法的建立及应用[D];西南大学;2007年
9 金华利;口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2004年
10 王小波;猪肉弓形虫检验方法的研究[D];扬州大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026