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《新疆农业大学》 2011年
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农杆菌介导转Bt基因海岛棉技术体系的建立及抗虫性鉴定

周丽容  
【摘要】:本研究通过对陆地棉和海岛棉下胚轴体细胞胚胎发生差异研究,探讨陆地棉和海岛棉组织培养过程中的差异,并且以新海30和新海16胚性愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行Bt基因的遗传转化,通过T1代PCR及T2代RT-PCR检测证实外源基因已整合到了海岛棉基因组中,获得转基因植株,对得到转基因株系进行初步的抗虫性检测,虫饲喂结果初步证实转基因植株具有抗虫性。本研究取得的主要成果如下 1.以海岛棉和陆地棉无菌苗下胚轴为外植体,在采用相同的愈伤组织诱导和愈伤组织增殖基本培养基下,筛选海岛棉和陆地棉胚性愈伤组织分化的最佳条件,陆地棉胚性愈伤最适分化条件为:MSB添加1.9g/L KNO3,胚性愈伤组织分化率达到70%以上;海岛棉胚性愈伤组织分化条件:MSB添加1.9g/L KNO3,和0.3mg\LNAA;胚性愈伤组织分化率达到60%以上。陆地棉胚性愈伤组织增殖培养基为:MSB中添加1.9g/L KN03并添加2.0g/L凝固剂gelrite、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺;海岛棉胚性愈伤组织增殖培养基为:MSB中添加3.8g/L KN03并添加2.0g/L凝固剂gelrite、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺。 2.海岛棉体细胞形态建成培养基:MSB中KN03加倍并添加2.0g/L凝固剂gelrite、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺及0.05mg/L IBA。 3.农杆菌介导海岛棉新海30和新海16的胚性愈伤组织,获得转Bt基因的转基因植株。转化条件为:海岛棉胚性愈伤组织于OD值为0.5-0.6的菌液中浸染15min后共培养24h。处理完毕后,将胚性愈伤组织转入添加50mg/L卡那霉素及400mg/L头孢霉素的培养基中,诱导转基因体细胞胚胎分化。抗性子叶胚最佳成苗培养基1/2MSB添加300mg/L头孢霉素和gelrite 2g/L。 4.获得的T1代转基因植株进行卡那霉素初步检测,检测结果显示卡那霉素抗性率为12.6%。将卡检阳性的植株进行PCR检测初步筛选转基因植株,并对T1代转基因植株进行抗虫性初步测定,结果显示转基因海岛棉具有一定的抗虫性。将获得的T1代转基因海岛棉经组织培养后获得T2代组培苗,并对T2代转基因植株进行RT-PCR检测,结果显示Bt基因在T2代转基因植株中能够正常传递。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S562

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【参考文献】
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