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《新疆农业大学》 2016年
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牛源金黄色葡萄球菌FnBPA-A分子不同遗传多态性重组质粒免疫生物学特性研究

王彩蝶  
【摘要】:奶牛乳房炎是危害奶牛产业健康发展的重要疾病之一,给奶牛业造成了巨大经济损失。金黄色葡萄球菌是导致奶牛乳房炎重要的致病菌,耐药菌株的出现严重阻碍了该病的治疗。黏附素可在金黄色葡萄球菌早期感染过程中发挥重要作用,FnBPA是该菌重要的黏附素之一。本研究以金黄色葡萄球菌FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒为研究对象,旨在阐明FnBPA-A分子遗传多态性与其免疫生物学特性的关系。本研究在对牛乳源金黄色葡萄球菌黏附素FnBPA-A序列分析的基础上,利用构建的FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒对小鼠进行免疫,比较分析其免疫生物学特性。检测结果表明,FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒免疫小鼠后抗血清对不同金黄色葡萄球菌的识别能力不同。检测结果还显示,FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒免疫后的抗血清可对金黄色葡萄球菌粘附纤维蛋白原(Fg)表现显著抑制作用(P0.05),但FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒抗血清之间在抗粘附效果方面差异不显著(P0.05),不同重组质粒刺激淋巴细胞增殖能力和IFN-γ水平表现不同程度的升高。不同重组质粒免疫后小鼠免疫保护力不同,并且与细胞免疫水平相关。本研究选用奶牛乳腺组织块接种法与胰蛋白酶消化分离培养及纯化牛乳腺上皮细胞。通过对特异性的角蛋白18进行鉴定,证明纯化的细胞为牛乳腺上皮细胞。并进一步测定得出纯化后的牛乳腺上皮细胞的生长曲线。利用荧光染料CFSE和DiI分别对金黄色葡萄球菌与乳腺上皮细胞进行染色,在激光共聚焦显微镜下观察金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的粘附。比较4株不同金黄色葡萄球菌分离株对牛乳腺上皮细胞的粘附能力,结果表明不同金黄色葡萄球菌分离株对牛乳腺上皮细胞的粘附能力不同,其中GY278分离株对乳腺上皮细胞的粘附能力最强,并且与其它分离株差异显著(P0.05)。进一步利用培养的牛乳腺上皮细胞检测与分析FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒免疫后抗血清对4株不同金黄色葡萄球菌分离株粘附乳腺上皮细胞的影响。结果显示,FnBPA-A不同遗传多态性重组质粒免疫后抗血清能够抑制金黄色葡萄球菌粘附乳腺上皮细胞,不同的FnBPA-A遗传多态性抗血清抑制能力存在差异,同一FnBPA-A遗传多态性抗血清抑制不同金黄色葡萄球菌粘附乳腺上皮细胞差异不显著(P0.05)。本研究为金黄色葡萄球菌免疫学研究提供实验依据。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S852.611

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