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《新疆农业大学》 2016年
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马链球菌诱导RAW264.7细胞和树突状细胞Toll样受体及细胞因子表达的研究

杜润慈  
【摘要】:树突状细胞(Dendritic Cells,DCs)和巨噬细胞(Macrophages,MΦs)是马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,S.equi)感染的主要宿主细胞。当细菌进入机体后会被细胞表面的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别,进而通过不同的信号通路途径,启动细胞因子的表达,参与炎症反应。为探究Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)介导的信号通路在S.equi感染宿主细胞中的作用,本研究主要开展了以下两个方面的工作:(1)采用实时荧光定量PCR技术,分析S.equi的感染对RAW264.7细胞TLRs、髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)及细胞因子mRNA表达水平的影响。结果显示,S.equi感染RAW264.7细胞后6 h,TLR1、TLR2、TLR6与MyD88 mRNA表达水平较未感染组变化不明显;感染后12 h,TLR1、TLR2和TLR6 mRNA表达水平未出现变化,而MyD88 mRNA表达水平高于未感染组;感染后24 h,TLR1、TLR2、TLR6、IL-10和IL-12 mRNA表达水平出现明显升高,但是IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表达水平均显著下降。结果表明,TLRs介导的信号通路参与S.equi感染RAW264.7细胞的免疫应答反应。(2)利用GM-CSF、IL-4刺激小鼠骨髓细胞使其分化为DCs,S.equi感染DCs后16、20、26 h,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞TLRs、MyD88和细胞因子mRNA的表达水平。结果显示,S.equi感染DCs后16、20、26 h,TLR1、TLR2、TLR6、MyD88 mRNA表达水平均高于未感染组。S.equi感染DCs后16、26 h,IL-1 mRNA表达水平较未感染组变化不明显,IL-10和TNF-αmRNA表达水平明显升高。IL-6在S.equi感染DCs后16 h,mRNA表达水平显著上升,但感染后26 h变化不明显。IL-12在S.equi感染DCs后16 h,mRNA表达水平没有变化,但感染后26 h有所升高。通过TLR2阻断型抗体对DCs进行预处理,分别应用流式细胞术和实时荧光定量PCR方法分析TLR2的缺失对DCs成熟标记分子CD80、CD86、MHCII及细胞因子表达的影响。结果显示,TLR2的缺失不能阻断DCs CD80、CD86、MHCII的表达,但是可以显著抑制IL-6、IL-12 mRNA表达水平。结果表明,S.equi具有调节DCs TLRs、MyD88和细胞因子mRNA表达水平的能力,并且S.equi诱导DCs产生IL-6和IL-12可能是依赖TLR2信号通路。综上所述,本研究发现S.equi能够影响RAW264.7细胞和DCs TLRs、MyD88和细胞因子mRNA的表达水平,并且DCs分泌IL-6和IL-12是通过TLR2介导的信号通路实现。这些研究可为明确S.equi与靶细胞之间的相互作用提供试验依据。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S852.61

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