新疆甜瓜转ACC脱氨酶基因的研究
【摘要】：
通过对激素水平，子叶年龄，外植体种类，光照时间，培养温度等影
响植株再生因子的研究，建立了甜瓜无性再生体系。然后通过对转化过程
中卡那霉素，氨苄青霉素用量，侵染和共培养时间的研究，确立了以农杆
菌介导的表达ACC脱氨酶基因的转化体系。按照该体系，用农杆菌侵染
三种甜瓜‘皇后’、‘迦师瓜’、‘红蜜脆’培养8天的子叶块，接种在MS附
加1.0mg/L BA，75mg/L卡那霉素和200mg/L氨苄青霉素的培养基上，在
温度27±1℃，光照2000lx条件下，20天左右出现不定芽的分化；继续将
这些不定芽接种在MS附加0.1mg/L IBA，50mg/L卡那霉素和200mg/L氨
苄青霉素的培养基上，诱导根的产生，最终获得了转化植株。通过对转化
植株的PCR扩增检测证明，1kb的ACC脱氨酶基因已经整合到甜瓜基因
组中。
【关键词】：甜瓜 ACC脱氨酶基因 转基因 植株再生 【学位授予单位】：新疆农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：S652
【目录】：
- 中文摘要6-7
- 英文摘要7-9
- 引言9-10
- 文献综述10-17
- 1 实验材料、设备及试剂17-18
- 1．1 植物材料17
- 1．2 农杆菌菌株17
- 1．3 主要设备及试剂17-18
- 2 实验方法18-24
- 2．1 甜瓜无性再生体系的建立18-19
- 2．1．1 甜瓜无菌苗的获得18
- 2．1．2 甜瓜愈伤组织和不定芽的诱导18-19
- 2．1．3 甜瓜再生植株的获得及移栽19
- 2．2 农杆菌介导的甜瓜遗传转化19-21
- 2．2．1 农杆菌菌液的制备19-20
- 2．2．2 Kana临界浓度及Amp用量的梯度实验20
- 2．2．3 甜瓜外植体的浸染20-21
- 2．2．4 甜瓜外植体的共培养及脱菌处理21
- 2．2．5 转化愈伤的形成及芽的分化21
- 2．2．6 甜瓜转化植株的再生21
- 2．3 甜瓜转化植株检测21-24
- 2．3．1 转化植株的Kana抗性筛选检测21-22
- 2．3．2 转化植株目的基因的PCR检测22-24
- 3 实验结果与分析24-37
- 3．1 甜瓜无性再生体系建立24-30
- 3．1．1 不定芽诱导培养基的确定24-25
- 3．1．2 不同的激素配比对不定芽诱导的影响25-27
- 3．1．3 外植体种类与子叶日龄对愈伤组织形成的影响27-29
- 3．1．4 外界环境条件对植株再生的影响29-30
- 3．2 甜瓜遗传转化体系建立30-35
- 3．2．1 农杆菌菌株的贮藏及活化30-31
- 3．2．2 Kana浓度对愈伤组织和不定芽诱导的影响31-33
- 3．2．3 Amp用量对不定芽诱导的影响33-34
- 3．2．4 侵染时间与共培养时间的确定34
- 3．2．5 Amp脱菌浓度的确定34
- 3．2．6 转化植株的获得34-35
- 3．3 甜瓜转化植株检测35-37
- 3．3．1 Kana抗性筛选结果35
- 3．3．2 转化植株PCR检测结果35-37
- 4 讨 论37-39
- 5 结 论39-40
- 附图表40-46
- 参考文献46-51
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