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《新疆农业大学》 2002年
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胡杨液泡膜H~+-ATPase的纯化及其耐盐性机理研究

马挺军  
【摘要】: 胡杨是一个极为难得的耐盐性高大乔木树种,主要分布于我国西北荒漠和半荒漠地区,是这一地区能形成森林的唯一乔木树种,对维持当地脆弱的生态平衡具有非常重要的作用,对胡杨耐盐性的研究无疑具有极其重要的理论与实用价值。本文是国家自然基金重点项目“胡杨对渗透胁迫和离子胁迫的感知和耐盐机理研究”的部分工作。V-H+ATPase利用水解ATP释放的能量将质子由胞质泵入液泡,产生跨膜的电化学势为其它离子和代谢产物的次级主动运输提供驱动力,以维持胞质pH稳定及离子平衡。V-H+ATPase的逆境条件应答功能对保证细胞的正常生命活动具有重要的调节作用。利用悬浮培养的胡杨细胞研究了盐胁迫对V-H+ATPase活性的影响,摸索了纯化V-H+ATPase的方法,得到部分纯化的V-H+ATPase,为进一步纯化全酶,进行体外重组,研究各亚基的功能和膜脂与蛋白的相互作用,用单颗粒技术解析V-H+ATPase的结构提供了基础,目的在于最终将揭示盐胁迫下胡杨V-H+ATPase活性调控的可能机制,为筛选植物耐盐品种提供理论依据。 1. 改进了胡杨细胞悬浮培养体系,细胞得率提高了3倍多。 2. 完善了从胡杨细胞分离纯化液泡膜微囊的试验流程。 3. 从底物特异性,抑制特性和离子激活特性证明胡杨液泡膜H+ATPase具有典型的V-H+ATPase的特征。 4. 摸索了增溶和分离方法,得到部分纯化的V-H+ATPase的主要亚基:68-,57-,30-,26和17KD亚基。 5. 研究了盐胁迫对胡杨液泡膜H+ATPase水解活性和质子转运活性的影响,以及对A-亚基和B-亚基的影响,这是从分子水平阐明胡杨耐盐性机理的重要突破性进展。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S792.11

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