收藏本站
《新疆农业大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

H7亚型禽流感基因工程亚单位疫苗的研究

李贺  
【摘要】:应用RT-PCR方法扩增A/PFV/Restock/34(H7N1)HA 1.7kb的HA基因,然后克隆到pMD-18T载体中,筛选到阳性重组子pMDH7HA,经酶切和PCR鉴定正确后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBac4.5/V5-His-TOPO的下游,随机筛选得到重组转移载体命名为pBHis-H7HA,经序列分析证明HA基因完整。与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-Blue~(TM) DNA)共转染Sf9昆虫细胞,经三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rpH7HA。将重组杆状病毒在High Five细胞中表达,SDS-PAGE上有一63.7kD大小的泳带,正常细胞对照组无此条带,表明目的蛋白已表达。Western-blot实验结果显示表达H7HA蛋白在63.7 kD位置出现特异性阳性条带,说明所表达目的的蛋白有免疫学活性。 将目的蛋白定量后用弗氏完全佐剂乳化预制成禽流感H7HA基因工程亚单位疫苗。15只SPF鸡平均分三组:一次免疫组、加强免疫组和对照组。以20μg/羽剂量免疫三周龄一次免疫组、加强免疫组SPF鸡,两周后对加强免疫组进行二免:一免四周时(加强免疫组二免两周时)攻毒,结果表明一次免疫组对同源强毒攻击的保护率为40%,加强免疫组对同源强毒攻击的保护率为100%,对照组全部死亡。鸡攻毒后3天、5天和7天,分别取各组鸡的咽拭子,泄殖腔拭子进行病毒分离。结果显示加强免疫组鸡咽拭子、泄殖腔拭子均未检测到排毒,一次免疫组鸡有两只可以检测到,而对照组鸡攻毒后5天内全部死亡。分离实验表明该疫苗对禽流感有一定的保护力。本研究研制的H7亚型禽流感亚单位疫苗期待为我国的禽流感防制作出贡献。 我们使用10L转瓶对昆虫/杆状病毒表达系统大规模表达禽流感H7HA重组目的蛋白进行了的研究。结果表明:维持27.5℃,转速150rpm,添加10u/L的表面活性剂肝素钠,细胞接种密度2×10~5~3×10~5cell/ml可通过昆虫/杆状病毒表达系统在转瓶得到大量的具有生物学活性的目的蛋白。本实验可作为生产禽流感基因工程亚单位疫苗抗原的探索,并为下一步规模化生产奠定基础。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S852.5

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘志刚;刘立峰;陈伦勇;孙青松;金梅林;;禽流感新型疫苗研究进展[J];动物医学进展;2013年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李淑娜;鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌二联多价蜂胶疫苗的研制及其免疫应答反应的动态研究[D];四川农业大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李贺;孟庆文;冉多良;于康震;陈化兰;李永强;吴东来;;禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达[J];中国预防兽医学报;2006年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
2 乔传玲;表达禽流感病毒HA-NA、HA-NP及NP基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2001年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
7 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
8 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
9 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
10 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
6 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
7 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
8 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
9 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
10 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
7 张文韬;基于量子点的禽流感病毒检测新方法探索[D];武汉大学;2010年
8 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
10 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 李正平;猪流感病毒H_3N_8亚型NA基因的克隆和原核表达及间接ELISA方法的建立[D];华中农业大学;2010年
4 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
5 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
6 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
7 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
8 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
9 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
10 裴兰英;HSP_(70)与MDV肿瘤的发生发展相关性研究[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋慧娟;罗文新;郑振华;陈瑛炜;陈毅歆;陈自敏;张军;夏宁邵;;高致病性禽流感病毒血凝素蛋白广谱中和表位模拟肽的筛选与鉴定[J];病毒学报;2008年06期
2 黄金海,王英珍,丁伯良,肖西治,李秀丽,赵向华;间接ELISA检测禽霍乱抗体方法的建立[J];动物医学进展;2001年02期
3 李文杨,黄瑜,程龙飞,苏敬良,郭玉璞;Ⅰ型鸭疫里默氏菌灭活油乳化疫苗的研制及其近期保护率的测定[J];福建畜牧兽医;1999年02期
4 程龙飞;施少华;傅光华;李文杨;彭春香;黄瑜;陈溥言;;2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用[J];福建农业学报;2006年02期
5 蔡弋;刘思伽;余双祥;李胜;罗映霞;;鸭疫里默氏菌和大肠杆菌二联油乳剂灭活苗的研究[J];广东畜牧兽医科技;2007年05期
6 亢文华,郝俊峰,张仲秋,宁宜宝,宋立,赵德明;鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感三联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验[J];中国畜牧兽医;2005年07期
7 戴鼎震;李康然;;禽大肠杆菌菌毛产生的特性及免疫原性研究[J];广西农学院学报;1992年02期
8 程安春,汪铭书,郭宇飞,方鹏飞,刘兆宇,陈孝跃,周毅;鸭疫里默氏菌1,2,4和5型铝胶复合佐剂四价灭活疫苗的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2004年12期
9 刘菲,李成军,黄勇;猪瘟的流行与控制[J];黑龙江畜牧兽医;2005年08期
10 李淑娜;蒋文灿;刘义铃;郑维维;;SPA与鸭IgG的结合性研究[J];黑龙江畜牧兽医;2008年09期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 朱德康;程安春;汪铭书;;五种血清型的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白特性比较及其免疫原性的研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 邵美丽;猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗的研究[D];东北农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 方鹏飞;间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测四种血清型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究[D];四川农业大学;2002年
2 邱美珍;禽流感核酸疫苗免疫保护性研究[D];湖南师范大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 黄秀芬;章振华;王天坤;孙惠玲;陈小玲;李永清;;沙门菌鞭毛蛋白增强禽流感灭活疫苗的免疫效力研究[J];动物医学进展;2014年09期
2 何世成;王昌建;邱立新;王卫国;唐小明;鲁杏华;林源;范仲鑫;朱春霞;刘道新;;重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型Re-6株)对散养鸭免疫效果的研究[J];动物医学进展;2014年09期
3 陈义锋;赵亚荣;牟巍;;鸭疫里默氏菌疫苗及其效力检测方法研究进展[J];中国兽药杂志;2010年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 倪粒琼;鸭源大肠杆菌与鸭疫里默氏杆菌原生质体融合及其融合子研究[D];四川农业大学;2011年
2 李晓艳;表达两种不同血清型的鸭大肠杆菌融合株的构建及其免疫原性的研究[D];四川农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 岳莉莉,齐义鹏,杜全胜,李燕;用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HBVe抗原[J];病毒学报;1998年03期
2 金元昌,李景鹏,张龙,孙岳,于敏,杨甲芳;禽流感病毒分子生物学研究进展[J];动物医学进展;2003年01期
3 于康震;哈兽研所禽流感研究最新进展[J];兽医科技信息;1996年01期
4 唐秀英,田国斌,于康震,冯菊艳;禽流感油乳剂灭活疫苗的研究[J];中国预防兽医学报;1999年06期
5 贾永清,陈化兰,邓国华,唐秀英,田国斌,于康震,刘保全;禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析[J];中国预防兽医学报;2000年01期
6 乔传玲,乔传玲,于康震,于康震,贾永清,刘明,刘明,孟庆文,孟庆文,田国彬,唐秀英;表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
7 陈化兰,于康震,田国斌,唐秀英,卢景良;H_5和H_7亚型禽流感病毒HA基因的RT-PCR扩增及克隆[J];中国畜禽传染病;1997年02期
8 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震;中国禽流感流行株的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1998年01期
9 田国斌,唐秀英,于康震;禽流感病毒人工感染鸡抗体的监测及血凝素分型血清的制备[J];中国畜禽传染病;1998年01期
10 崔尚金,陈化兰,唐秀英,邓国华,田国斌,于康震;禽流感RT-PCR诊断法的建立[J];中国畜禽传染病;1998年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李曦,田国彬,唐秀英,于康震;禽流感病毒河北株的分离鉴定[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
2 ;韩国开发成功针对H_5N_1禽流感病毒的疫苗菌株[J];山东家禽;2004年03期
3 范宗理;鸭子可扩大禽流感病毒传播的危险性[J];自然杂志;2005年03期
4 ;哪些消毒剂能有效杀灭禽流感病毒?[J];家禽科学;2005年11期
5 ;2005年11-12月全球重大动物疫情综述[J];中国动物检疫;2006年01期
6 多是;;人类如何赢得与禽流感的赛跑[J];中国禽业导刊;2006年04期
7 ;越南北部奠边省出现禽流感疫情[J];养殖与饲料;2009年03期
8 陈伯伦,张泽纪,陈伟斌;禽流感研究I.鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定[J];中国兽医杂志;1994年10期
9 胡薛英;国外禽流感病毒的研究进展[J];畜牧兽医科技信息;1994年12期
10 杨宁;;国外对禽流感的预防和处置[J];中国动物保健;1999年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张洪军;;禽流感后养禽业如何走出低谷[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];2011年
2 单芬;郑煦灿;韦良孟;徐成刚;罗开健;任涛;辛朝安;焦培荣;廖明;;一株H5N2亚型鹦鹉源禽流感病毒分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3 李艳华;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草药的研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
4 高雪丽;;抗禽流感病毒免疫的研究进展[A];2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议论文集[C];2008年
5 何义林;叶冬青;;禽流感病毒对人类感染机制的研究进展[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
6 李英霞;杨丽丽;高睿;;禽流感的危害与防制[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
7 孙恩泽;谢敏;赵海粟;黄碧海;刘书琳;张万坡;张志凌;王汉中;庞代文;;量子点标记禽流感病毒[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
8 陈化兰;;中国H5N1禽流感病毒的进化和疫苗研究研制及应用[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
9 刘桂林;张小辉;王锦平;;禽流感病毒H6N2亚型NA基因序列相关肽链特性及其二级结构分析[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
10 ;热电在AnalyticaChina 2006展出禽流感检测仪器[A];第三届科学仪器前沿技术及应用学术研讨会论文集(二)[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 王均珠;贵阳制定三项措施防范“人禽流感”[N];贵阳日报;2005年
2 新华社记者  卢苏燕;人类如何赢得与禽流感的赛跑[N];光明日报;2006年
3 颜亮;新年禽流感在全球卷土重来[N];经济参考报;2007年
4 本报记者 叶芳 通讯员 邹钦;多休息勤洗手 远离禽流感[N];广东科技报;2008年
5 黄显斌;对付禽流感:三十六计“走”为上[N];大众科技报;2005年
6 朱玉;禽流感还要“飞”多远?[N];科技日报;2005年
7 见习记者 杨茜;我市防控禽流感进入[N];嘉兴日报;2005年
8 张孟军;禽流感病毒H5N1正在突变[N];科技日报;2004年
9 李学梅;此次流感病毒并未发生大变异[N];北京日报;2007年
10 肖玮;首款抗禽流感中药面临难产[N];北京商报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 侯小强;促炎细胞因子及p53蛋白在哺乳动物禽流感致病中的作用研究[D];吉林大学;2010年
2 张文韬;基于量子点的禽流感病毒检测新方法探索[D];武汉大学;2010年
3 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 范胜涛;野鸟禽流感监测及哺乳动物跨种传播能力评估[D];北京协和医学院;2014年
5 朱光剑;中国南方H9N2禽流感病毒的分子进化分析及其对小鼠致病性研究[D];华东师范大学;2012年
6 刘学东;禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗的设计、表达制备及动物实验研究[D];中国海洋大学;2010年
7 丛立新;禽流感病毒感染SPF鸭抗体消长规律及相关microRNA表达研究[D];吉林大学;2012年
8 杜元钊;新城疫—禽流感H9二联灭活疫苗的研究[D];南京农业大学;2011年
9 鞠湘武;H5N1型禽流感病毒损伤细胞溶酶体的机制研究和南极极端环境下科考队员的应激反应研究[D];北京协和医学院;2012年
10 柴洪亮;黑龙江地区野生鸟类禽流感的分子流行病学调查研究[D];东北林业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
2 赵会连;不同处理和不同保存时间对重组(H5N1亚型,Re-5株)禽流感病毒效力的影响[D];河南农业大学;2010年
3 刘红彦;H9N2 AIV的NS1基因原核与真核表达及NS1蛋白对几种细胞凋亡的影响[D];西北农林科技大学;2010年
4 孙宇;禽流感病毒血凝素的分离纯化以及快速评估其宿主特异性方法的研究[D];西北大学;2010年
5 王建琪;禽流感野鸭源分离株H2N2亚型和H3N8亚型基因特征及遗传进化分析[D];东北林业大学;2011年
6 林彬彬;禽流感病毒H9亚型福建分离株的全基因组测定及遗传演化分析[D];福建农林大学;2011年
7 张强哲;H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北农林科技大学;2003年
8 王章泽;安徽与辽宁部分农村卫生人员人/禽流感防控知识知晓现况研究[D];安徽医科大学;2010年
9 黄娟;单抗介导的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)快速检测禽流感病毒[D];河南农业大学;2003年
10 宫爱艳;鸡源抗禽流感病毒Fab噬菌体抗体库的构建研究[D];西南农业大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026