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《新疆农业大学》 2007年
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基因修饰的鸡新城疫病毒F_(48)E_9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力的评价

贺笋  
【摘要】: 为了寻求一种更加有效防控鸡新城疫病毒的途径,我们构建了NDV F48E9株的HN基因修饰的核酸疫苗,并通过体外表达实验和SPF鸡免疫实验对其进行了评估。 本研究利用密码子使用频率表,将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA[A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) HA gene, Accession No: AF 144305]蛋白信号肽序列。修饰后HN基因命名为SoptiHN,剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中,将他们分别命名为pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN,并用这些质粒转染293T细胞,48小时后间接免疫荧光和West-blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。随后,将重组质粒pVAX1、pVAX1-CpG、pV-HN、pVC-HN、pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN采用四头肌多点注射三周龄SPF鸡,PBS设为空白对照组;一免后三周以相同的剂量加强免疫,二免后以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒,计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫及攻毒前后每周采集血清和外周血淋巴计算HI抗体和细胞因子IFN-γ和IL-18动态变化情况。 体外表达实验结果显示,与未经修饰的HN基因相比,修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。在随后的SPF鸡免疫实验中,实验结果显示,在攻毒前只有修饰过的HN基因免疫组的HI抗体滴度超过了24,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN分别为5.33±0.72和5.17±1.17,其余的免疫组都未能达到24。在随后的攻毒保护实验结果中也呼应了这一结果,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN免疫组都产生了71%的保护效率,而pV-HN和pVC-HN只有50%,空载体和空对照未能产生保护效力。我们从IFN-γ和IL-18检测的结果可以看到,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN诱导的细胞免疫水平高于其它免疫组。除空白组以外,其余的免疫组IFN-γ和IL-18表达水平在一免后一周升高,到二免一周达到最高峰,很快下降,攻毒后有很快上升但是没有超过二免一周的水平。在此过程中,我们发现,载体中包含CpG-ODN序列时可以诱导较高水平的细胞免疫。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S852.5

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 白莲花,于春,鲍秋莉,顾芳,李娟,陈乃玲,钱振超;新城鸡瘟病毒诱导人粘附性单个核细胞产生一氧化氮与细胞毒性[J];上海免疫学杂志;1998年03期
2 白莲花,钱振超;新城鸡瘟病毒激活的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究 [J];上海免疫学杂志;1994年06期
3 李楠;孙一敏;赵宝华;;鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究[J];生物工程学报;2006年03期
4 邓明俊,张彦明,梁荣,段明星;鸡新城疫病毒F基因高效真核表达质粒的构建[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2003年02期
5 余兴龙,涂长春,李红卫,陈创夫,李作生,马正海,孙明,殷震;猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究[J];中国病毒学;2000年03期
6 吉学仁;种鸡场IBD与ND免疫的关系[J];中国家禽;2001年03期
7 闻晓波;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;刘春国;步志高;;新城疫病毒F_(48)E_9株M NP F和HN基因的真核表达[J];中国兽医科学;2006年06期
8 姜永厚,陈奖励,宋秀龙,童光志,孔宪刚,刘忠贵;鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建[J];中国预防兽医学报;2001年02期
9 姜永萍,李呈军,张洪波,步志高,张芳芳,邓国华,于康震,陈化兰;含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究[J];中国预防兽医学报;2005年06期
10 龚伟,金宁一,薛立娟,罗琴芳,孙大辉,葛涛,李萍;NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达[J];中国兽医学报;2002年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王选年;贾文科;银梅;岳峰;田献礼;;鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析[J];新乡学院学报(自然科学版);2010年01期
2 吕宏旭,汪岷,李红岩,郭华荣,张士璀,包振民,周丽;利用牙鲆鳃细胞系分离和培养淋巴囊肿病毒[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2003年02期
3 洪波,王品虹,纪义国,熊祥云,汪笑宇,张立斌;臭氧对空气中IBV冠状病毒的杀灭效果的研究[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2003年06期
4 冯遵成,赵可胜,张希东,徐万群,洪波;臭氧对物体表面IBV冠状病毒的杀灭效果的研究[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2004年06期
5 肖履中;猪源大肠埃希氏菌表面超微结构的研究[J];青海大学学报(自然科学版);2002年04期
6 朵红;猪生殖和呼吸系统综合症[J];青海畜牧兽医杂志;2000年01期
7 张西云,阎高峰;PCR技术在畜禽疫病诊断中的应用[J];青海畜牧兽医杂志;2000年01期
8 肖履中;应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒[J];青海畜牧兽医杂志;2000年02期
9 肖履中;鸡痘病毒HQ98株超微结构观察[J];青海畜牧兽医杂志;2000年03期
10 吴雅玲;猪伪狂犬病[J];青海畜牧兽医杂志;2001年02期
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘月环,徐宁迎,吴旧生;肠毒素型大肠杆菌(ETEC)F18抗原与猪抗病育种的研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2000年06期
2 严燕;殷宗俊;;猪遗传抗性与抗病育种研究进展[J];猪业科学;2007年06期
3 卢岳;糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因表达与临床相关疾病[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2004年02期
4 曹果清,周忠孝,朱向芳;转基因猪的研究进展[J];畜牧与兽医;2002年05期
5 亓小红,张勤,刘培琼,宋春云,徐如海;仔猪腹泻抗性相关特异表达ESTs的筛选(英文)[J];遗传学报;2004年03期
6 施启顺,谢新民,柳小春,黄生强,贺长青;猪肠毒素大肠杆菌(ETEC)F18受体基因型检测报告[J];遗传;2002年06期
7 蒋隽,施启顺,柳小春,黄生强,贺长青;不同猪种肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体微卫星标记遗传差异性研究[J];遗传;2004年02期
8 刘鑫;施启顺;柳小春;蒋隽;黄生强;;不同猪种肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体的微卫星标记遗传效应分析[J];遗传;2006年08期
9 何阳花;俞英;张沅;;拷贝数变异与疾病的关系及其在动物抗病育种中的应用前景[J];遗传;2008年11期
10 王红宁;;仔猪腹泻成因及综合防治技术措施[J];中国畜牧杂志;2006年06期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴厚生,谢琪,姜小玲,范行义;用~3H-TdR释放法测量细胞介导的细胞毒功能[J];上海免疫学杂志;1987年04期
2 白莲花,钱振超;新城鸡瘟病毒激活的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究 [J];上海免疫学杂志;1994年06期
3 陈水平,刘素辉,范宝昌,赵慧,姜涛,秦成峰,杨保安,秦鄂德;SARS病毒BJ01株核壳蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定[J];微生物学免疫学进展;2005年02期
4 张立昌,张建红;家禽的呼吸道免疫和免疫抑制[J];中国家禽;1997年01期
5 刘伟忠,吴艳涛,刘秀梵,张如宽,彭大新,姜焱;新城疫病毒F_(48)E_8株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定[J];中国兽医科技;1997年06期
6 丁壮,金宁一,王兴龙,金扩世,罗坤,王宏伟,殷震;新城疫病毒四平株HN蛋白基因的克隆与序列分析[J];中国预防兽医学报;2000年02期
7 丁壮,金宁一,王兴龙,金扩世,王宏伟,吕杰,李太元,米志强,殷震;新城疫病毒HN蛋白基因真核表达载体的构建及其表达[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
8 余兴龙,涂长春,李作生,马正海,李红卫,吴健敏,吕宗吉,殷震;以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究[J];中国预防兽医学报;1999年03期
9 丁壮,金宁一,王兴龙,金扩世,罗坤,郭志儒,殷震;新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性分析[J];中国兽医学报;2000年04期
10 丁壮,金宁一,王兴龙,金扩世,李太元,吕杰,米志强,夏志平,殷震;NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较[J];中国兽医学报;2000年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙金福,卫广森;提高DNA疫苗免疫效力的策略[J];现代畜牧兽医;2005年05期
2 王利丽;王云峰;孙惠玲;杨春富;都兴洋;王玫;步志高;童光志;;传染性喉气管炎病毒基因疫苗免疫效应[J];畜牧兽医学报;2007年02期
3 刘丽平;焦新安;张小荣;潘志明;;减毒沙门菌运送的H9N2亚型禽流感病毒DNA疫苗的研制及其免疫试验[J];动物医学进展;2007年09期
4 潘志明,焦新安,黄金林,殷月兰,唐丽华,张辉,张晓明,张小荣,刘秀梵;携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力[J];微生物学报;2005年06期
5 潘志明;唐丽华;程宁宁;黄金林;胡青海;焦新安;刘秀梵;;携带禽流感病毒DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门菌的免疫效力[J];中国兽医科学;2007年02期
6 胡永浩;包世俊;赵有淑;温峰琴;姚学萍;杨焕良;陈化兰;;表达H1N1、H3N2猪流感病毒HA基因重组质粒在小鼠的免疫效力[J];畜牧兽医学报;2007年12期
7 贺笋;石星明;王云峰;王玫;冉多良;童光志;;基因修饰对鸡新城疫病毒F_(48)E_9株HN基因DNA疫苗表达效力的影响[J];生物工程学报;2008年02期
8 胡元庆,卫广森;DNA疫苗佐剂研究进展[J];动物医学进展;2005年04期
9 刘文,李明峰,胡巍;新型免疫疫苗——DNA疫苗[J];淄博学院学报(自然科学与工程版);2000年04期
10 魏财文;兽用DNA疫苗的研究进展及应用[J];中国兽药杂志;2003年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 姜永萍;张洪波;张平静;王全英;赵有淑;李雁冰;邓国华;陈化兰;;H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对鹅的免疫保护效力[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
2 潘志明;焦新安;黄金林;唐丽华;张辉;张成全;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗鼠伤寒沙门氏菌的安全性和免疫效力试验[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
3 江云波;方六荣;肖少波;牛传双;张辉;陈焕春;;修饰的ORF5基因增强猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的免疫反应[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
4 彭金美;童光志;王云峰;仇华吉;;抗禽流感病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫效力研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
5 潘志明;焦新安;黄金林;殷月兰;唐丽华;张辉;张晓明;张小荣;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
6 唐丽华;潘志明;程宁宁;张晓明;黄金林;胡青海;焦新安;;运送禽流感病毒DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的实验室免疫效力研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
7 居巍;刘君炎;;结核杆菌HSP65佐剂DNA疫苗的实验研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
8 王小华;姜广水;吴钦贞;姜萍萍;刘浩;江浩;;二价双启动子防龋DNA疫苗的构建及鉴定[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
9 姜秀云;何昭阳;;活体电穿孔法导入DNA:牛结核病免疫接种新技术[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
10 靳彦文;钟辉;马清钧;;恶性疟原虫DNA疫苗的安全性研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 蒋明 周汉桥;DNA疫苗研究取得突破[N];健康报;2005年
2 林明贵 金关甫;DNA疫苗 战胜结核的希望[N];健康报;2003年
3 ;防治早老性痴呆DNA疫苗问世[N];新华每日电讯;2004年
4 ;DNA疫苗“饿”杀小鼠肿瘤[N];医药经济报;2003年
5 陈勇;西尼罗病毒DNA疫苗开始临床试验[N];健康报;2005年
6 河北农业大学动物科技学院副教授 宋勤叶;得以控制的疫病为何卷土重来[N];河南科技报;2009年
7 梅子;期待从今天开始[N];医药经济报;2001年
8 刘恕;艾滋病疫苗离我们还有多远[N];科技日报;2005年
9 瑞普(保定)生物药业有限公司 尤永君 王延树;不同抗原含量鸡新城疫油苗对鸡体液免疫应答的影响[N];中国畜牧兽医报;2009年
10 张晓鹏;高致病性禽流感防治研究获重大突破[N];中国畜牧兽医报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高慧;人乳头瘤病毒16E6/7转基因小鼠模型的建立及HPV16DNA疫苗的研究[D];扬州大学;2005年
2 郭瀛军;猪带绦虫囊虫病DNA疫苗的中试及免疫效力研究[D];第二军医大学;2004年
3 张洪英;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性和安全性研究[D];第二军医大学;2003年
4 张静;轮状病毒分子流行病学调查及脂质体DNA疫苗研究[D];重庆医科大学;2002年
5 王涛;嗜肺军团菌mip基因DNA疫苗初步研究[D];四川大学;2004年
6 宋立强;异种同源钙激活Cl~-通道DNA疫苗对小鼠哮喘模型的防治作用[D];第四军医大学;2004年
7 时阳;MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建及体内外功能验证[D];吉林大学;2004年
8 张梦寒;汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段核酸疫苗pEGFP-M-S的构建及基因免疫研究[D];苏州大学;2005年
9 焦解歌;猪Endoglin DNA疫苗诱导抗肿瘤血管生成机理研究[D];中南大学;2005年
10 郭慧琛;O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制[D];中国农业科学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贺笋;基因修饰的鸡新城疫病毒F_(48)E_9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力的评价[D];新疆农业大学;2007年
2 刘丽平;减毒沙门氏菌运送的H9亚型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
3 焦凤超;减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒口服DNA疫苗的免疫效力研究[D];扬州大学;2005年
4 曾伟伟;密码子优化和分子佐剂增强新城疫病毒F基因DNA疫苗免疫效果[D];中国农业科学院;2009年
5 张恒;鸡贫血病毒DNA疫苗的研究[D];山东师范大学;2003年
6 曾政;布鲁氏菌新型疫苗的构建及其免疫原性研究[D];西北农林科技大学;2004年
7 杨帆;鸡传染性支气管炎病毒分离株IBV_(WHNJ)M基因DNA疫苗研究[D];四川农业大学;2004年
8 杨璇;癌胚抗原DNA疫苗的构建及佐剂对其免疫效应的影响[D];郑州大学;2002年
9 张强哲;H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北农林科技大学;2003年
10 蒋英;白细胞介素12对结核病DNA疫苗效应的增强作用[D];重庆医科大学;2003年
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