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猪粪中沙门氏菌的分离鉴定及体外抑菌方法的研究

任娟  
【摘要】: 本文从新疆某猪场的小猪、种公猪、哺乳母猪、经产母猪、后备母猪的猪粪中筛选得到五株沙门氏菌,并对其进行生理生化和血清学鉴定;选择抗生素、中草药及益生乳酸杆菌发酵液对分离鉴定出的沙门氏菌进行抑菌实验。在沙门氏菌药敏性实验中,选用圆纸片扩散实验法(Kirby-Baueer Dise Diffusion),选择常用12种抗生素,测定其对沙门氏菌抑菌效果;在中草药抑菌实验中,选择常用15味中草药煎剂及6种复方制剂,采用试管二倍稀释法,测定其最小抑菌浓度(MIC);在乳酸菌代谢产物的抑菌实验中,利用牛津杯法(Oxford Cup method),测定益生乳酸菌代谢产物对沙门氏菌的抑菌效果,初步研究了乳酸菌代谢产物的特性;在厌氧环境的抑菌试验中,研究益生乳酸菌协同中草药方剂对猪肠道沙门氏菌的抑菌效果。 结果表明: (1)从新疆某猪场的小猪、种公猪、哺乳母猪、经产母猪、后备母猪的猪粪中分离鉴定的五株沙门氏菌分别为:乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonlla paratyphi B)、斯坦利沙门氏菌(Salmonlla stanley)、雷根特沙门氏菌(Salmonella regent)、德尔卑沙门氏菌(Salmonlla derby)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)。 (2)在抗生素的抑菌试验中,从猪粪中分离鉴定出的5株沙门氏菌,都有不同程度的耐药现象存在;所试验的12种抗生素中,5株沙门氏菌对阿米卡星,头孢克肟,头胞噻肟这三种药物高度敏感;对庆大霉素、利福平、多粘菌素B等药物耐药;对新霉素的耐药率为60%,对氧氟沙星的耐药率均为40%,对土霉素、利特灵、头孢三嗪、硫酸粘杆菌素的耐药率为20%。 (3) 15味单味中草药对5株沙门氏菌的抑菌效果:贯众对所有沙门氏菌的抑菌作用最强;黄芪、苦参、连翘、白术、葛根,这几种药物的抑菌作用较强;黄柏,山萸肉,刺五加,石榴皮这四种药物有一定的抑菌作用;野菊花、陈皮、甘草、栀子的抑菌作用较弱,而夏枯草抑菌作用最弱。6种中草药复方合剂对5种沙门氏菌的抑菌效果:复方Ⅱ最强;其次为复方Ⅴ,抑菌效果较强;再次为复方Ⅰ、复方Ⅲ、复方Ⅳ及复方Ⅳ均有一定的抑菌作用。而且6种中草药复方合剂的抑菌效果都强于单味草药的抑菌效果。 (4)在益生乳酸菌发酵液对沙门氏菌的抑菌试验中,从5株乳酸菌中筛选出1株既耐酸又耐胆盐的益生乳酸菌lact2,提取其发酵液进行抑菌试验,结果表明益生菌lact2发酵上清液对5株沙门氏菌均有较好的抑菌作用;lact2的代谢产物在pH值2.0时抑菌活性最强,pH值达6.0以上丧失活性,并且代谢产物的抑菌物质对热稳定,其活性不被过氧化氢酶,蛋白酶K,胃蛋白酶和胰蛋白酶酶等破坏。 (5)在厌氧环境的抑菌试验中,可得出中草药复方Ⅱ和乳酸菌发酵液均能有效的抑制沙门氏菌,并且中草药复方Ⅱ协同益生乳酸菌lact2的抑菌效果强于任何一单方面作用的抑菌效果;中草药复方Ⅱ可以促进益生乳酸菌的增殖,因此说明它具有益生元和药理的双重作用;中草药复方Ⅱ协同乳酸菌lact2对5株沙门氏菌的抑菌效果强弱依次为:乙型副伤寒沙门氏菌德尔卑沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌斯坦利沙门氏菌雷根特沙门氏菌。


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