收藏本站
《新疆农业大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

养殖刺参(Apostichopus japonicus)“腐皮综合症”重要病原的核酸检测技术

张凤萍  
【摘要】: 对本实验室鉴定的成参“腐皮综合症”主要致病菌——灿烂弧菌(Vibrio splendidus)的16s-23s间区(Intergenic spacer,IGS)进行了PCR扩增、克隆、测序和分析,设计出针对灿烂弧菌的特异性PCR引物,建立了PCR检测方法。从纯化的Vibrio splendidus DNA和携带Vibrio splendidus刺参组织DNA中成功地扩增出产物大小为177 bp的DNA片段,该对引物对Vibrio splendidus的检测灵敏度为0.5pg,与其它细菌Vibrio fluvialis、Vibrio angillar- um、Vibrio alginolyticus、Aeromonas hydrophila、Vibrio harveyi、Vibrio parahaemolyticus、Vibrio vulnificus的DNA均无交叉反应。 在已建立的Vibrio splendidus PCR检测方法的基础上利用非放射性标记物地高辛(D- IG)制备了DNA探针,通过核酸探针斑点杂交检测方法对此探针特异性及灵敏度进行检验,结果表明其对Vibrio splendidus DNA的检出灵敏度为6.25 pg,且无非特异性的反应,说明该探针具有较高的灵敏度及特异性。对人工感染和取自青岛、烟台、威海呈现皮肤溃烂等典型“腐皮综合症”的海参提取溃烂组织DNA,然后用PCR和斑点杂交对上述样品进行检测,阳性检出率均为100%。 同时用上述制备的探针进行原位杂交检测,结果证明在体壁结缔组织、肌肉组织、肠粘膜上皮和辐水管检测到阳性杂交信号。 在建立PCR、斑点杂交及核酸探针原位杂交检测技术等快速检测技术的基础上,对人工感染试验患病刺参溃烂组织、未患病刺参组织以及空白对照组等样品不经过细提组织DNA,通过组织匀浆直接进行快速检测。结果显示:采取粗提DNA的方式进行PCR和斑点杂交快速检测,阳性检出率比细提组织DNA的检出率低,用原位杂交对未出现病症的刺参的阳性检出率低于出现病症海参的阳性检出率。PCR、斑点杂交和核酸探针原位杂交对人工感染试验后发病和尚未发病刺参总的阳性检出率分别是96.9%、90.6%、87.5%。
【学位授予单位】:新疆农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S947.9

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余俊红,陈吉祥,厉云,苟万里,纪伟尚,徐怀恕;聚合酶链反应(PCR)检测花鲈鳗弧菌感染[J];黄渤海海洋;2002年02期
2 张晓华,徐怀恕,许兵,纪伟尚,韩茵,杨学宋,马建康;中国对虾弧菌病的间接荧光抗体诊断技术研究[J];海洋与湖沼;1997年06期
3 史成银,宋晓玲,黄倢,杨丛海;核酸斑点杂交分析法检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)[J];海洋与湖沼;1999年05期
4 宋立超,樊景凤,刘述锡,梁玉波;病原性海洋弧菌快速检测方法的研究进展[J];海洋环境科学;2005年01期
5 陈师勇,莫照兰,徐永立,张培军;水产养殖病原微生物检测技术研究进展[J];海洋科学;2002年09期
6 王印庚,荣小军,张春云,孙素凤;养殖海参主要疾病及防治技术[J];海洋科学;2005年03期
7 谢建军;王印庚;张正;荣小军;;养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot-ELISA快速检测[J];海洋科学;2007年08期
8 王崇明,杨冰,宋晓玲,黄偼;应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究[J];海洋水产研究;1999年01期
9 张春云;王印庚;荣小军;孙惠玲;董树刚;;国内外海参自然资源、养殖状况及存在问题[J];海洋水产研究;2004年03期
10 杨冰,宋晓玲,黄倢,史成银,刘莉,刘庆慧,宋微波;对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)PCR检测方法的建立[J];海洋水产研究;2005年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于春霞,王维娜,王安利;中国对虾的研究进展[J];河北大学学报(自然科学版);2001年04期
2 薛超波,王国良,金珊,郑天伦;海洋微生物多样性研究进展[J];海洋科学进展;2004年03期
3 李志明;冯伟业;;PCR技术在水产养殖动物病原微生物检测中的应用[J];华北农学报;2007年S3期
4 陈翠珍;张晓君;房海;范莉;葛慕湘;何振平;;杀虾微杆菌血清同源性及血清学检验[J];河北科技师范学院学报;2008年01期
5 常林瑞;孙振兴;李莉;李云玲;;刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化[J];湖北农业科学;2007年01期
6 刘天华;李乐乐;乔梦;解斐;;一株海洋光合细菌D25的分离与鉴定[J];湖北农业科学;2011年16期
7 王一卓;罗慧;赵士贤;;合欢花挥发油化学成分及提取液抑菌作用研究[J];湖北农业科学;2012年06期
8 陈丽;张晓君;秦蕾;毕可然;;条斑紫菜褐斑病原褐藻酸降解菌的筛选与鉴定[J];湖北农业科学;2012年13期
9 郑江,徐晓津;我国对虾病毒性疾病[J];河北渔业;2002年01期
10 常忠岳,衣吉龙,慕康庆;影响刺参生长及成活的因素[J];河北渔业;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 林克冰;方琼珊;吴建绍;周宸;何丽斌;林琪;王涵生;;石斑鱼神经坏死病毒传播途径阻断的初步研究[A];第三届全国现代生态渔业管理与技术研究[C];2011年
2 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
3 薛德林;胡江春;王国安;刘丽;王书锦;;海洋红酵母、光合细菌、黄腐酸在海参育苗和养成中的应用效果[A];第七届全国绿色环保肥料(农药)新技术、新产品交流会论文集[C];2008年
4 王茂华;胡白石;许志刚;;玉米枯萎病菌及其近缘种的ITS序列比较[A];2003’华东植物病理学术研讨会暨江苏省植物病理学会第十次会员代表大会论文集[C];2003年
5 郭明星;朱堂明;陈晨;赵晖;王振华;陈建军;徐新生;;湖北省水产品中单增李斯特菌基因分型研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
6 王忠发;王建跃;卢亦愚;何伟贤;王学海;;实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年
7 李金花;王蒂;杨合同;柴兆祥;李国权;;引起马铃薯块茎腐烂的 Pseudomonas marginalis pv.Marginalis 的分离鉴定[A];2006年中国作物学会马铃薯专业委员会年会暨学术研讨会论文集[C];2006年
8 王殿夫;麻丽丹;;养殖河豚鱼弧菌病原菌的鉴定和生物学特性分析[A];中国畜牧兽医学会——第三届中国兽医临床大会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王冰;降解丝素放线菌的分离鉴定、发酵条件优化及其降解机制研究[D];山东农业大学;2009年
2 陈士国;几种海洋动物酸性多糖的结构和活性研究[D];中国海洋大学;2010年
3 常耀光;海参岩藻聚糖硫酸酯及其酶解产物的制备、结构与活性研究[D];中国海洋大学;2010年
4 张琴;刺参(Apostichopus japonicus Selenka)高效免疫增强剂的筛选与应用[D];中国海洋大学;2010年
5 金波昌;池塘养殖刺参(Apostichopus japonicus)食物来源的稳定同位素法研究[D];中国海洋大学;2010年
6 常杰;对虾和刺参敏感免疫学指标的筛选和评价[D];中国海洋大学;2010年
7 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
8 刘营;不同饲料对刺参(Apostichopus japonicus)生长及能量收支的影响及机制[D];中国海洋大学;2010年
9 董秀萍;海参、扇贝和牡蛎的加工特性及其抗氧化活性肽的研究[D];江苏大学;2010年
10 张月杰;刺参岩藻多糖对神经干/前体细胞的增殖作用及其机制研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
2 郭艳萍;抑黄曲霉乳酸菌的筛选及菌种鉴定[D];安徽农业大学;2010年
3 卢超;仿刺参(Apostichopus japonicus)AFLP遗传连锁图谱的构建[D];中国海洋大学;2010年
4 周慧慧;刺参(Apostichopus japonicus)肠道益生菌的应用研究[D];中国海洋大学;2010年
5 谷珉;仿刺参(Apostichopus japonicus)免疫增强剂的体外筛选与养殖试验的评估[D];中国海洋大学;2010年
6 白楠;凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei、仿刺参Apostichopus japonicus免疫增强剂使用频率和免疫疲劳的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 李晓林;海参虫草复剂对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
8 杜以帅;酶解海藻产物对刺参(Apostichopus japonicus)肠道菌群和免疫相关因子的影响[D];中国海洋大学;2010年
9 乔迁;大菱鲆红体病虹彩病毒核酸疫苗及两种海水名贵鱼类疾病的研究[D];中国海洋大学;2010年
10 李刚;刺参(Apostichopus japonicus)主要营养成分和生理变化对养殖水体中关键环境因子的响应研究[D];中国海洋大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张进兴,孙修勤;中国对虾卵细胞中病毒的初步研究[J];黄渤海海洋;1997年01期
2 孙修勤,张进兴,曲凌云;中国台湾地区及世界部分主要海水养殖国家养殖疾病综述[J];黄渤海海洋;1999年04期
3 王国良,金珊,薛良义,钱云霞;海水网箱养殖鲈鱼皮肤溃疡病及其病原菌的研究[J];黄渤海海洋;2000年03期
4 余俊红,陈吉祥,厉云,苟万里,纪伟尚,徐怀恕;聚合酶链反应(PCR)检测花鲈鳗弧菌感染[J];黄渤海海洋;2002年02期
5 王世党,宋宗岩,苏海岩,王同永;海参发病的原因及预防措施[J];河北渔业;2004年05期
6 康明,韩志辉,李刚,魏建华,祝秀梅,李香德;Dot-ELISA法检测鱼粉中沙门氏菌的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2004年07期
7 张煜;刘永宏;;国内、外刺参研究的回顾、进展及其资源增殖途径的探讨[J];海洋渔业;1984年02期
8 张莹,徐文弟;酶联免疫吸附测定法在医学研究中的新进展[J];哈尔滨医科大学学报;2000年04期
9 战文斌,俞开康;海参和海胆的疾病[J];海洋湖沼通报;1993年01期
10 孙奕,陈騳;刺参体内外微生物组成及其生理特性的研究[J];海洋与湖沼;1989年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张春云;养殖刺参(Apostichopus japonicus)主要细菌性疾病的病原学研究[D];中国海洋大学;2004年
2 荣小军;养殖刺参(Apostichopus japonicus)主要疾病的流行病学和组织病理学研究以及寄生虫病病原学初探[D];中国海洋大学;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张凤萍;王印庚;李胜忠;荣小军;廖梅杰;张正;;应用PCR方法检测刺参腐皮综合征病原——灿烂弧菌[J];海洋水产研究;2008年05期
2 孙奕,陈騳;刺参体内外微生物组成及其生理特性的研究[J];海洋与湖沼;1989年04期
3 李吉强,郝小星,高伟尹,瑞业;虾池垒石养殖刺参技术[J];科学养鱼;2004年04期
4 周维武;发展刺参池塘筑礁养殖的措施及对策[J];中国水产;2005年01期
5 孙德华;刺参人工育苗和养殖过程中存在的问题及其解决方法[J];中国水产;2005年03期
6 肖树旭,顾功超;刺参南移与人工育苗试验[J];水产学报;1981年02期
7 乔聚海;刺参池塘养殖的研究[J];海洋科学;1988年04期
8 佘金梅,金太哲,党中印;虾池养殖刺参技术初探[J];科学养鱼;2003年05期
9 刘锡胤,张晓明,徐惠章;刺参养殖的夏季管理[J];科学养鱼;2003年08期
10 李鲁晶;对当前池塘养殖刺参病害防治方法的认识[J];齐鲁渔业;2004年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 艾海新;王崇明;王秀华;李赟;宋微波;;PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒[A];中国海洋湖沼学会中国动物学会贝类学分会第十二次学术讨论会摘要[C];2005年
2 谭诗文;余波;冉懋韬;蔡一鸣;艾玉萍;王璇;张华;;牛源HBV套式PCR方法建立及其S靶基因同源性分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
3 王平;王辉;许文兵;朱元珏;;肺组织结核分枝杆菌巢式PCR快速检测[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
4 回文广;赵廷昌;孙福在;张卉;王建荣;高孝强;田丽;;实时荧光定量PCR原理及其应用[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
5 吴淑芳;付瑞;邢瑞昌;贺争鸣;;猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
6 张太翔;凌宗帅;徐彪;梁成珠;朱来华;孙军;王洪兵;;实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 吴驰;张红梅;詹能勇;邓永聪;单万水;余卫业;;荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
8 周素娟;张铁军;何纳;;HCV的C/E1区PCR扩增方法的改进[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
9 李青;钟青萍;王丽;;海产品中副溶血弧菌的PCR快速检测方法的建立[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
10 陈信忠;任聪;龚艳清;王寿昆;;实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 山东省龙口市水产技术推广站 孙显武;刺参加工技术[N];河北科技报;2004年
2 记者马永刚;刺参中间苗种培育新技术通过验收[N];中国食品报;2009年
3 记者马永刚;山东实现刺参饲料无公害目标[N];中国食品报;2009年
4 许钟;免发冻干刺参加工工艺[N];中国渔业报;2004年
5 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术(10)[N];山东科技报;2003年
6 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术[N];山东科技报;2003年
7 李金锋;陈淑玲;刺参的加工技术[N];中国海洋报;2004年
8 荣成市海洋与渔业局 常忠岳;刺参养殖技术(12)[N];山东科技报;2003年
9 杨威;刺参的形态和习性[N];中国海洋报;2002年
10 王连华;刺参健康养殖[N];中国渔业报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2 渠柏艳;基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究[D];东北大学;2009年
3 张丽;实时定量PCR检测儿童急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因[D];北京协和医学院;2011年
4 李泽松;缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用[D];重庆大学;2008年
5 陈智勇;胰腺癌相关基因mucin4的初步研究[D];第二军医大学;2005年
6 王彦君;细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因微卫星多态性与炎症性肠病相关性研究[D];吉林大学;2008年
7 马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
8 李学渊;沿海地区手部慢性特殊感染的病因学及诊治的研究[D];复旦大学;2005年
9 迟文娟;东北小麦白粉病菌群体遗传结构与分子检测技术研究[D];沈阳农业大学;2009年
10 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张凤萍;养殖刺参(Apostichopus japonicus)“腐皮综合症”重要病原的核酸检测技术[D];新疆农业大学;2008年
2 王稳;利用RT-PCR验证基于小鼠外显子芯片发现的脑缺血相关基因表达的研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
4 郭世奎;实时荧光定量PCR技术对结直肠癌患者肠道微生态的研究[D];昆明医学院;2011年
5 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
6 刘志国;实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
7 郑升博;猪链球菌多重PCR检测方法的建立及屠宰场样品感染率的调查研究[D];上海交通大学;2010年
8 刘宁;PCR扩增16srRNA基因以快速诊断败血症及分型细菌[D];南昌大学;2010年
9 陈晶晶;不同纳米材料对PCR优化作用的研究及机制探讨[D];东华大学;2011年
10 谭景尹;PCR—膜芯片~(?)技术检测结核杆菌耐药基因突变的应用研究[D];广西医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026