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《石河子大学》 2010年
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鸡和鹌鹑属间杂交种睾丸发育不良机制的初步探索

周玲玲  
【摘要】:鸡与鹌鹑杂交种是禽类中比较典型的远缘杂交成功的实例,但其杂交的受精率和孵化率都很低,杂交种出壳后睾丸发育不良且不育,因此,目前尚不能应用于生产。睾丸是雄性动物的主要生殖器官和精子生成的场所,同时也是合成和分泌某些激素的场所,对维持雄性动物的正常生理和生育起着重要的作用。睾丸的生长发育受多种因素的影响,其中AR、ER基因作为雄、雌激素受体对睾丸的发育可能起着一定的影响作用。睾丸的发育过程又是一个细胞增值和凋亡的动态过程,而Bcl-2和PCNA是与细胞凋亡和增值相关的基因。本研究采用荧光定量PCR对睾丸AR、ER、PCNA和Bcl-2等基因表达水平的发育性变化进行了比较研究,同时结合组织学方法分析了鸡与鹌鹑及其杂交种睾丸形态的物种间差异,以探索鸡与鹌鹑属间杂交种睾丸发育不良的相关机理。 一、鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸形态结构差异应用解剖学和组织学方法对成年鸡、鹌鹑及其杂交种的睾丸形态学进行比较研究。结果表明:(1)杂交种睾丸成乳酪色,右侧位置高于左侧,左侧略大于右侧,其上无血管,睾丸内侧面未见附睾,体积及重量明显小于鸡和鹤鹑的睾丸。(2)杂交种的曲细精管直径,生精上皮高度和曲细精管体积密度均远远低于鸡和鹌鹑,而且杂交种生精细胞,支持细胞的数量均比鸡和鹌鹑少。 二、鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中AR、ER的表达差异及发育性变化 (1)鸡与鹌鹑睾丸中AR mRNA表达变化模式相似,即呈先升高后下降趋势。而杂交种睾丸中AR mRNA表达变化模式则有所不同呈逐渐下降趋势。推测杂交种睾丸中AR基因表达可能异常。(2)鸡、鹌鹑及杂交种睾丸中ER基因表达发育模式各不相同,因此推测出ER基因的表达存在着物种差异。 三、鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中Bcl-2基因表达差异及发育性变化 鸡睾丸组织中Bcl-2 mRNA表达量在20~30日龄时逐渐升高,50日龄时有所下降,50~90日龄逐渐升高并达到峰值,120日龄显著下降(P0.05)并达到最低值。鹌鹑睾丸组织中Bcl-2 mRNA表达量在9~40日龄时逐渐下降并达到低谷,之后迅速回升并维持在较高水平。杂交种睾丸组织中Bcl-2 mRNA表达量在10~90日龄时基本上没有变化。提示Bcl-2基因在调控杂交种睾丸中细胞凋亡的模式不同于鸡和鹌鹑。 四、鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中PcNA基因表达差异及发育性变化 鸡和鹌鹑睾丸组织中PCNA基因表达的发育性变化模式基本相似,均呈先下降然后极显著(P0.01)升高并达到峰值,之后又逐渐下降的趋势,说明PCNA在鸡和鹌鹑睾丸的正常发育过中可能起着着重要作用。杂交种睾丸中PCNA mRNA表达无明显变化,说明在杂交种睾丸发育过程中,可能不存在明显细胞增值过程。
【关键词】: 鹌鹑 杂交种 睾丸 发育
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S839
【目录】:
  • 摘要5-6
  • Abstract6-8
  • 缩略词表8-9
  • 目录9-12
  • 前言12-13
  • 第一章 文献综述13-29
  • 第一节 远缘杂交概述13-16
  • 1 远缘杂交研究进展13
  • 2 远缘杂交的应用13-14
  • 3 远缘杂交中存在的问题14
  • 4 鸡与鹌鹑的属间杂交14-16
  • 第二节 禽类睾丸16-20
  • 1 睾丸的形态位置16
  • 2 睾丸的结构及功能16-20
  • 第三节 AR和ER基因的研究进展20-23
  • 1 AR基因20-21
  • 1.1 AR的结构和功能20
  • 1.2 睾丸中AR的分布及功能20-21
  • 2 ER基因21-23
  • 2.1 雌激素受体生物活性21-22
  • 2.2 雌激素受体的类型及结构22
  • 2.3 雌激素受体与睾丸发育22-23
  • 第四节 Bcl-2的研究进展23-26
  • 1 Bcl-2基因23-24
  • 2 鸡Bcl-2基因的研究进展24-26
  • 第五节 PCNA基因研究进展26-29
  • 1 PCNA的结构及功能26-27
  • 1.1 PCNA的分子结构26
  • 1.2 PCNA的功能26-27
  • 2 睾丸中PCNA的研究进展27-29
  • 第二章 实验研究29-56
  • 第一节 鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织形态结构的比较29-34
  • 1 材料与方法29
  • 1.1 实验动物饲养与管理29
  • 1.2 组织样品的采取与制作29
  • 1.3 数据统计29
  • 2 结果与讨论29-33
  • 2.1 鸡、鹌鹑、鸡与鹌鹑属间杂交种睾丸的大小29-31
  • 2.2 光镜观察结果31-33
  • 3 讨论33-34
  • 第二节 鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中AR、ER的表达差异及发育性变化34-45
  • 1 材料与方法34-36
  • 1.1 实验动物34
  • 1.2 主要试剂和仪器34-35
  • 1.3 荧光定量PCR测定睾丸中AR、ER的相对表达量35-36
  • 1.3.1 引物设计35
  • 1.3.2 总RNA提取和反转录35-36
  • 1.3.3 PCR反应条件36
  • 1.3.4 PCR产物回收及克隆测序36
  • 1.3.5 Real time PCR36
  • 1.3.6 数据分析36
  • 2 结果与分析36-44
  • 2.1 AR、ER和β-actin基因PCR扩增结果和克隆质粒测序结果36-39
  • 2.2 睾丸组织中AR、ER基因的相对表达量39-44
  • 2.2.1 睾丸中AR基因的相对表达量39-41
  • 2.2.2 睾丸中ER基因的相对表达量41-44
  • 3 讨论44-45
  • 第三节 鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中Bcl-2基因的表达差异及发育性变化45-51
  • 1 材料与方法45-46
  • 1.1 实验动物45
  • 1.2 主要试剂和仪器45
  • 1.3 荧光定量PCR测定睾丸中Bcl-2的相对表达量45
  • 1.3.1 引物设计45
  • 1.3.2 总RNA提取和反转录、PCR反应条件45
  • 1.4 PCR产物回收及克隆测序45
  • 1.5 Real time PCR45-46
  • 1.6 数据处理46
  • 2 结果与分析46-49
  • 2.1 Bcl-2基因PCR扩增结果和克隆质粒测序结果46-47
  • 2.2 睾丸组织中Bcl-2基因的相对表达量47-49
  • 3 讨论49-51
  • 第四节 鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸中PCNA基因的表达差异及发育性变化51-56
  • 1 材料与方法51
  • 1.1 实验动物51
  • 1.2 主要试剂和仪器51
  • 1.3 荧光定量PCR测定睾丸中PCNA基因的相对表达量51
  • 1 3.1 引物设计51
  • 2 结果与分析51-55
  • 2.1 PCNA基因PCR扩增结果和克隆质粒测序结果51-52
  • 2.2 睾丸组织中PCNA基因的相对表达量52-55
  • 3 讨论55-56
  • 全文讨论与总结56-58
  • 创新点58-59
  • 参考文献59-64
  • 作者简介64-65
  • 致谢65-66
  • 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表66

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