收藏本站
《石河子大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

STIM1、2在人脐静脉内皮细胞CaR介导Ca~(2+)内流及NO生成中的作用和机制

赵慧  
【摘要】:目的:探讨Ca~(2+)感受蛋白基质相互作用分子1,2(STIM1,2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙敏感受体(CaR)介导钙离子(Ca~(2+))内流和一氧化氮(NO)生成的作用和机制。国家自然科学基金(NO.31160239) 方法:(1)胰蛋白酶消化法原代培养HUVEC,倒置显微镜下观察细胞形态及免疫细胞化学法检测Ⅷ因子对其进行抗原鉴定。(2)取2~5代HUVEC随机分组:①对照组;②CaR激动剂组(精胺+Ca~(2+));③钙池操纵的钙离子通道(SOC)阻滞剂组(精胺+Ca~(2+)+MRS1836或+Gd~(3+)或+2-APB或+SKF-9636);④受体操纵的钙离子通道(ROC)阻滞剂组(精胺+Ca~(2+)+Ro31-8220与精胺+Ca~(2+)+Go6967);⑤ROC阻滞剂+ROC激活剂组(精胺+Ca~(2+)+Ro31-8220+TPA与精胺+Ca~(2+)+Go6967+TPA);⑥SOC阻滞剂+ROC阻滞剂组(精胺+Ca~(2+)+MRS1845+Ro31-8220或Go6967);⑦STIM1shRNA处理组:未转染组(对照组);干扰组:shSTIM1-002组、shSTIM1-003组、shSTIM1-004组;空质粒组(Vehicle组);⑧STIM2shRNA处理组:未转染组(对照组);干扰组:shSTIM2-001组、shSTIM2-002组、shSTIM2-003组;空质粒组(Vehicle组)。STIM1/STIM2shRNA处理组分别与含精胺+Ca~(2+)(SOC和ROC均被激活)、含精胺+Ca~(2+)+CaR抑制剂Calhex231+ROC模拟剂OAG(阻断SOC,激活ROC)、含精胺+Ca~(2+)+PKC抑制剂Ro31-8220或+PKCs、PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC,阻断ROC)的DMEM孵育20min(动态检测)。(3)针对GenBank中人来源STIM1、STIM2的cDNA序列设计并合成短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA),取2-5代HUVEC用脂质体法将shRNA转染入HUVEC。采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效率,Western blot方法检测STIM1、STIM2在各加药组中蛋白的表达及转染后的干扰效率,Real timeRT-PCR方法分别检测STIM1、STIM2mRNA表达及干扰效率。(4)免疫细胞化学技术检测STIM1、STIM2蛋白表达及定位。(5)荧光探针Fluo-2/AM负载测定细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)的变化,NO荧光探针DAF-FM DA测定细胞内NO生成的变化。(6)实验数据用均数±标准误表示,组间比较用单因素方差分析,均数间的比较采用t检验或卡方检验。所有数据采用SPSS17.0统计软件包进行分析,以p0.05表示差异有统计学意义。 结果:(1)细胞形态学与免疫细胞化学法检测Ⅷ因子证实原代培养的细胞为HUVEC。(2)HUVEC细胞转染48h后,荧光显微镜下可见成功转染STIM1干扰质粒的细胞发出绿色荧光,成功转染STIM2干扰质粒的细胞发出红色荧光。(3)免疫细胞化学技术检测显示:STIM1、STIM2蛋白表达于胞浆,两者共定位于胞浆。(4)总蛋白Western blot检测结果显示:与对照组相比,各加药组STIM1、STIM2蛋白表达均无差异(P0.05)。(5)STIM1/STIM2shRNA处理组Western blot检测结果显示:与Control组相比,Vehicle组无显著差异(p0.05);shSTIM1-002、shSTIM1-003、shSTIM1-004组STIM1蛋白表达都降低(干扰效率分别为43%、50%、74%)(p0.05),尤其是shSTIM1-004组STIM1蛋白表达明显降低(p0.05);shSTIM2-001、shSTIM2-002、shSTIM2-003组STIM2蛋白表达都降低(干扰效率分别为44%、80%、30%)(p0.05),尤其是shSTIM2-002组STIM2蛋白表达明显降低(p0.05)。(6)Realtime RT-PCR检测结果显示:与Control组相比Vehicle组无显著差异(p0.05);shSTIM1-002、shSTIM1-003、shSTIM1-004组STIM1mRNA表达均降低(干扰效率分别为56%、73%、91%)(p0.05),尤其是shSTIM1-004组STIM1mRNA表达明显降低(p0.05);shSTIM2-001、shSTIM2-002、shSTIM2-003组STIM2mRNA表达亦均降低(干扰效率分别为80%、88%、41%)(p0.05),尤其是shSTIM2-002组STIM2mRNA表达明显降低(p0.05)。(7)HUVEC中[Ca~(2+)]i荧光变化值结果如下:与Control组(精胺+Ca~(2+)组,Δratio=5.84±0.10)相比Vehicle组(Δratio=5.80±0.05)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(Δratio=4.60±0.18)[Ca~(2+)]i△ratio值明显降低(p0.05); shSTIM2-002组(Δratio=5.75±0.13)无显著差异(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+CaR抑制剂Calhex231+ROC模拟剂OAG组,Δratio=2.79±0.04)相比Vehicle组(Δratio=2.91±0.18)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(Δratio=1.09±0.02)[Ca~(2+)]i△ratio值明显降低(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+PKC抑制剂Ro31-8220组,Δratio=3.15±0.10)相比Vehicle组(Δratio=2.90±0.08)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(Δratio=1.15±0.02)[Ca~(2+)]i△ratio值明显降低(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+PKCs、PKCμ抑制剂Go6967组,Δratio=4.26±0.04)相比Vehicle组(Δratio=4.17±0.14)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(Δratio=1.21±0.07)[Ca~(2+)]i△ratio值明显降低(p0.05)。(8)HUVEC中NO生成的结果如下:与Control组(精胺+Ca~(2+)组)(1105.18±31.97)相比Vehicle组(983.33±30.33)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(160.08±11.12)NO净荧光强度值明显降低(p0.05);shSTIM2-002组(1035.80±27.78)NO净荧光强度值无显著差异(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+CaR抑制剂Calhex231+ROC模拟剂OAG组)(177.17±20.09)相比Vehicle组(179.92±16.82)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(59.83±7.43)NO净荧光强度值明显降低(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+PKC抑制剂Ro31-8220组)(182.66±11.93)相比Vehicle组(175.52±31.64)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(56.27±5.71)NO净荧光强度值明显降低(p0.05)。与Control组(精胺+Ca~(2+)+PKCs、PKCμ抑制剂Go6967组)(201.43±7.48)相比Vehicle组(188.19±19.77)无显著差异(p0.05);shSTIM1-004组(56.06±7.71)NO净荧光强度值明显降低(p0.05)。 结论:(1) STIM1在CaR介导Ca~(2+)内流和NO生成中起着重要作用。(2)STIM1为CaR介导Ca~(2+)内流及NO生成中的关键分子组件;STIM2没有参与上述过程。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R363

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 梁霄;罗小林;钟华;胡清华;何芳;;小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成[J];生理学报;2012年03期
2 王振焕;胡清华;钟华;邓峰美;陈雄英;孙志萍;何芳;;小凹蛋白-1在脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成中的作用和机制[J];中国病理生理杂志;2011年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 Mohamed TREBAK;;STIM1 and Orai1:novel targets for vascular diseases?[J];Science China(Life Sciences);2011年08期
2 罗小林;钟华;梁霄;王振焕;龚艳;邓峰美;孙志萍;何芳;;小凹蛋白1上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导一氧化氮合酶激活的机制[J];中国动脉硬化杂志;2013年06期
3 梁霄;罗小林;钟华;胡清华;何芳;;小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成[J];生理学报;2012年03期
4 罗小林;梁霄;赵慧;王静;吴玲玲;钟华;何芳;;Filipin对人脐静脉内皮细胞小凹蛋白-1作用的研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2012年03期
5 王静;钟华;吴玲玲;赵慧;王腊梅;孙志萍;庞丽娟;何芳;;人脐静脉内皮细胞中C-型瞬时型感受器电位通道3RNA干扰质粒构建及筛选[J];石河子大学学报(自然科学版);2013年04期
6 赵慧;梁霄;钟华;张春军;何芳;;钙库活化的钙通道和受体活化的钙通道参与人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导的钙内流和NO生成[J];生理学报;2013年05期
7 张海洋;张会敏;;Hcy对脐静脉内皮细胞eNOS和caveolin-1表达影响[J];中国公共卫生;2012年05期
8 钟华;龚艳;吴玲玲;赵慧;王静;孙志萍;邓峰美;何芳;;小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制[J];中国病理生理杂志;2013年04期
9 宋鑫;余琴;刘应才;;醋柳黄酮及其单体抑制大鼠心肌肥大的实验研究[J];中国现代医学杂志;2013年22期
10 焦淑贤;胡彬;赵林;刘晓华;冯智慧;;Ca~(2+)参与骨髓间充质干细胞存活增殖及向肝细胞的诱导分化[J];中国组织工程研究;2013年40期
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 李恒宇;Orai1/CRACM1在内毒素引起钙超载中的机制研究[D];第二军医大学;2011年
2 彭海勇;mTOR活化增强的钙库操纵性钙内流限制TSC肿瘤的生长[D];北京协和医学院;2011年
3 邢红霞;6-OHDA诱导PC12细胞改变的机制与帕金森病伴发抑郁模型大鼠的制备[D];郑州大学;2013年
4 李奕;不同强度运动诱导mTOR信号对心肌肥大的作用研究[D];北京体育大学;2013年
5 韩军;映山红花总黄酮对脑缺血再灌大鼠脑血管舒张作用的EDHF/H_2S机制[D];安徽医科大学;2012年
6 闫玉涛;低渗环境对小鼠骨髓来源巨噬细胞功能的影响及其机制研究[D];华中科技大学;2013年
7 邓建新;正常与疾病心脏兴奋—收缩偶联调节机制的研究[D];南方医科大学;2013年
8 胡灵玉;子宫平滑肌细胞中SM22α蛋白的作用机制研究[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴龙飞;非诺贝特对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响[D];广西医科大学;2013年
2 黄国雄;CaSR在高肺血流性肺动脉高压大鼠中的作用及其与线粒体损伤的关系[D];广西医科大学;2013年
3 薛永;铅对非兴奋性细胞毒性机制的研究[D];南方医科大学;2012年
4 李满萍;梓醇对IgE介导的肥大细胞脱颗粒的影响及其机制研究[D];暨南大学;2013年
5 张娜;STIM1在黑色素瘤增殖中的作用研究[D];昆明医科大学;2013年
6 戴唯;ASPP家族蛋白表达质粒的构建及其在ROS诱导的HepG2细胞凋亡中的角色[D];浙江大学;2013年
7 胡珊;阿托伐他汀干预下CRP及CRP 1059G/C基因多态性对汉族人群脑梗死的影响[D];南华大学;2013年
8 陆启轩;Apelin基因内含子编码microRNA的生物信息学预测及其功能注释[D];南华大学;2013年
9 高丽丽;两个花生品种苗期钙素营养特性比较[D];中国农业科学院;2013年
10 王静;TRPC1、3在人脐静脉内皮细胞CaR介导Ca~(2+)内流及NO生成中的作用和机制[D];石河子大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 陈雄英;王振焕;胡清华;钟华;邓峰美;何芳;;细胞外钙受体调节人脐静脉内皮细胞游离钙离子浓度的研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2010年04期
2 王振焕;胡清华;钟华;邓峰美;何芳;;小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流[J];生理学报;2011年01期
3 李光伟;邢文婧;郝静辉;白淑芝;李宏霞;林岩;徐长庆;;钙敏感受体在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用[J];中国病理生理杂志;2010年12期
4 王振焕;胡清华;钟华;邓峰美;陈雄英;孙志萍;何芳;;小凹蛋白-1在脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成中的作用和机制[J];中国病理生理杂志;2011年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙丽莎,杨露春,翟辉;急性局灶性鼠脑组织缺血后NO含量的变化及其意义[J];脑与神经疾病杂志;1998年02期
2 周娅,佟书娟,王宁萍,赵建宁,黎雪如;枸杞多糖对小鼠巨噬细胞内酶活性及NO诱生的影响[J];山东中医杂志;2000年06期
3 许中,赵中,朱红胜,许献文;脑梗塞患者血清VEGF、NO和NOS测定及其意义[J];上海免疫学杂志;2000年03期
4 姜杰,唐勇;IL-1与椎间盘退行性病变[J];颈腰痛杂志;2000年04期
5 杨泽洲,耿排力,汪如源,靳国恩,赵秀丽;IL-1β、TNF-α和NO水平变化在某些神经系统疾病中的意义[J];西安医科大学学报;2001年01期
6 张骏,翁福海,李会强,卢奕,姚智;大黄素对内毒素刺激下的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF_α及NO的影响[J];天津医科大学学报;2001年02期
7 周丽莎,涂乾;子午流注纳支法对大鼠醋酸性胃溃疡愈合影响的实验研究[J];中医药研究;2001年04期
8 余德文 ,薛贵丽,华丕宏,王淑妮,尹玉琴;老年肺部感染与血清一氧化氮改变及其与外周血白细胞关系[J];中国医师杂志;2002年S1期
9 程丰,邵国富,张志霖,霍红梅,包仕尧;脑卒中患者血中NO、ET含量的改变及其临床意义[J];河南实用神经疾病杂志;2002年03期
10 陈雪辉,江京宁,芦春宁;急性脑血管意外患者血浆NO和SOD含量动态变化[J];青海医药杂志;2002年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈凤容;胡亚莉;阎岩;朱莉萍;胡清华;;钙贮池排空后STIM1分布的变化及其在核钙信号中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
2 陈桃香;张继伟;朱莉萍;汪涛;胡清华;;线粒体源性过氧化氢协同STIM1调节组胺诱导的钙内流[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
3 Roland Malli;Wolfgang F.Graier;;STIM and Orai modifies the insulin exocytosis in clonal pancreatic β-cells[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
4 杜海平;李裕明;;高糖对血管内皮细胞凋亡的影响及NO的保护作用[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
5 苗荣;穆丽璇;师文生;;基于硅纳米线的NO荧光传感器的制备及其在生物检测中的应用研究[A];中国化学会第28届学术年会第4分会场摘要集[C];2012年
6 李岩冬;安军;陈思原;张旭;洪彦航;王伟;王淑芳;;自组装仿生构建具有NO自催化生成功能的含硒人工血管材料[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)[C];2011年
7 朱宇君;袁福龙;许树军;张国;付宏刚;;La_(1-x)Ba_xCoO_3催化直接分解NO的研究[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
8 张庆富;刘鹏;白梅;;实验高压电烧伤血清ET-1、NO动态变化及乌司他丁的干预作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
9 王春光;张铁;张庆茹;;鸡大肠杆菌病血清NO、TNF-α水平检测及临床意义分析[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
10 马纪英;陈国元;;二硫化碳对雄性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴分泌功能的影响及NO的干预作用[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈季冰;企业办社会? No![N];华夏酒报;2010年
2 记者 徐晶晶;消费者对霸王条款有权说“NO”[N];滨海时报;2010年
3 叶茂中 顾小君;CI is no CI?[N];中国工商报;2000年
4 ;巴西CARAIBA铜公司计划扩产[N];中国有色金属报;2000年
5 徐德昭;欧盟9月起对白炽灯说NO[N];东莞日报;2009年
6 林永锋;石油价格也会对欧佩克说NO[N];中国能源报;2010年
7 钱文;首钢新钢联:对“瘦身”钢筋说“NO”[N];中国建设报;2010年
8 沈燕;让菜价飞?NO![N];扬州日报;2011年
9 殷昌盛;被传外资参股 真功夫说NO[N];东莞日报;2011年
10 本报记者 侯继勇;被严重低估 迅雷向纳斯达克说NO[N];21世纪经济报道;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 况春燕;STIM1/TRPC1复合体对EPCs修复损伤血管能力的影响[D];第三军医大学;2011年
2 马俊芬;调控食管鳞癌细胞CAR的表达对溶瘤腺病毒H101抗癌作用影响[D];郑州大学;2010年
3 庄柯;纳米Mn-Ti-O复合氧化物催化剂结构与NO选择性催化还原性能[D];南京大学;2011年
4 王海娟;Ad-PUMA用于肿瘤基因治疗的可行性研究[D];中国协和医科大学;2006年
5 王贲;富氧燃烧方式下典型煤种的NO释放特性及其化学反应动力学模拟[D];华中科技大学;2012年
6 冯皓;NO合酶抑制蛋白参与商陆皂苷甲抗炎调控的机制研究[D];第二军医大学;2011年
7 高尚锋;神经递质GABA和NO在抑郁症患者和应激模型中的病理意义[D];浙江大学;2012年
8 钟方芳;介导NO信号转导的人可溶性鸟苷酸环化酶的表达纯化及其结构与性质研究[D];复旦大学;2011年
9 刘春元;含焦油生物质气再燃还原NO的实验与机理研究[D];上海交通大学;2012年
10 高健;活性半焦低温催化氧化脱除烟气中NO的研究[D];中国海洋大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵慧;STIM1、2在人脐静脉内皮细胞CaR介导Ca~(2+)内流及NO生成中的作用和机制[D];石河子大学;2013年
2 胡亚莉;内皮细胞STIM1在钙库排空后其细胞内的分布变化[D];华中科技大学;2009年
3 胡亚莉;内皮细胞STIM1在钙库排空后其细胞内的分布变化[D];华中科技大学;2009年
4 张娜;STIM1在黑色素瘤增殖中的作用研究[D];昆明医科大学;2013年
5 王静;TRPC1、3在人脐静脉内皮细胞CaR介导Ca~(2+)内流及NO生成中的作用和机制[D];石河子大学;2013年
6 陈连凤;MSC干预实验性自身免疫性脑脊髓炎的机制探讨[D];中山大学;2012年
7 庞春秀;动脉平滑肌细胞STIM1/Orai1信号分子相互作用研究[D];福建医科大学;2012年
8 文津;STIM1/STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及免疫功能的影响[D];泸州医学院;2012年
9 孙志娟;STIM1/STIM2对人外周血单核细胞源性树突状细胞FcγRⅡ功能的影响[D];泸州医学院;2012年
10 后显华;STIM1在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用的初步研究[D];第三军医大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026