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《石河子大学》 2019年
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抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠肠道树突状细胞影响及其机制研究

赵正涌  
【摘要】:目的:通过抑制肝脏库普弗细胞功能,监测脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞的变化,进一步探讨其发生机制,为探究脓毒症发生发展中肝-肠互作机制,及脓毒症的救治新策略的提出奠定理论基础。第一部分:不同剂量氯化钆抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠粘膜固有层树突状细胞的影响方法:60只SD大鼠随机分为4组:假手术组、氯化钆预处理假手术组、脓毒症组和氯化钆预处理脓毒症组,每组6只大鼠。氯化钆预处理组分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的氯化钆(GdCl_3),假手术组大鼠注射等量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制脓毒症模型。术后24小时处死大鼠,利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10表达。组织病理学评价大鼠肠组织损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠肠粘膜固有层树突状细胞(LPDCs)。采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面主要组织相容性复合体(MHC)II及共刺激分子CD86的表达。结果:(1)血清及肠组织中,5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg GdCl_3抑制组促炎因子TNF-α和IL-6的表达相比脓毒症组显著下调(P0.05),而抑炎因子IL-10的表达显著上调,40 mg/kg GdCl_3组促炎因子TNF-α和IL-6的表达显著高于其他组。(2)肠组织病理学评价,脓毒症组相较于假手术组肠组织炎症损伤显著加重。而5 mg/kg、10 mg/kg、20mg/kg的GdCl_3能显著减轻肠组织的炎症损伤,40 mg/kg的GdCl_3组肠组织损伤较脓毒症组显著加重(P0.05)。(3)LPDCs的数量在CLP术后24小时显著减少(P0.05),5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg组均能显著增加LPDCs的数量(P0.05),40 mg/kg组的LPDCs数量较CLP组无显著差异。(4)相比于假手术组,CLP组MHC-II和CD86的表达显著上调(P0.05),而20 mg/kg GdCl_3预处理组MHC-II以及CD86的表达较脓毒症组显著下调(P0.05)。第二部分:抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞影响的时相性变化方法:72只SD大鼠随机分为4组,假手术组、GdCl_3预处理假手术组、脓毒症组和GdCl_3预处理脓毒症组,每组18只大鼠。GdCl_3预处理组,分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射20 mg/kg的GdCl_3,对照组大鼠注射同等剂量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症模型,各组分别于术后6 h、12 h及24 h处死6只大鼠。利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6及IL-10的表达。组织病理学评价大鼠肠组织炎症损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠LPDCs,采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面MHC-II及CD86的表达,检测LPDCs的凋亡率。Western Blot技术检测各组大鼠LPDCs自噬相关蛋白的LC3-II的表达。结果:(1)血清及肠组织中,CLP术后6 h开始TNF-α、IL-6及IL-10的表达较假手术组显著上调(P0.05),24 h达到最高。GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能使促炎因子TNF-α和IL-6的表达在各时间点较脓毒症组显著下调(P0.05),抑炎因子IL-10的表达显著上调(P0.05)。(2)肠组织炎症损伤评价,在6 h、12 h、24 h脓毒症组相比于Sham组肠组织炎症损伤显著加重,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显著减轻了脓毒症大鼠各时间点的肠组织损伤。(3)CLP术后6 h LPDCs的数量显著增加,12 h达到最大(P0.05),24 h显著减少,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能在各时间点显著增加了脓毒症大鼠LPDCs的数量。(4)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能明显抑制了各时间点脓毒症大鼠LPDCs表面MHC-II以及CD86的表达(P0.05)。(5)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显著降低了脓毒症大鼠各时间点LPDCs的自噬相关蛋白表达并下调其凋亡率(P0.05)。结论:(1)GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,其抑制程度呈剂量依赖。20mg/kg的GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,且不会加重脓毒症大鼠机体过度炎症反应和肠组织损伤。(2)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可减轻脓毒症大鼠机体炎症反应及肠组织损伤。其机制可能与抑制脓毒症大鼠机体促炎因子TNF-α和IL-6的表达有关。(3)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可降低LPDCs抗原提呈以及激活T细胞的能力,并可通过促进脓毒症大鼠外周DCs向肠道迁移并下调其自噬和凋亡水平从而维持LPDCs数量的稳定。其机制可能与促进抑炎因子IL-10的表达有关。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R459.7

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