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《石河子大学》 2018年
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硒化新疆乌拉尔甘草多糖抗炎免疫调节作用研究

连科迅  
【摘要】:炎症是许多疾病最基本的病理过程,而炎症反应与免疫机制密不可分。中草药多糖由于自身天然无毒、无残留等特殊优点,有效避免了化学药物的毒副作用,对于研制低毒高效的新型抗炎免疫药有着明显的开发优势。甘草多糖(Glycyrrhiza polysaccharide,GP)是甘草主要的活性大分子之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等生物活性。硒(Selenium,Se)是人体和其他生命形式所必需的微量元素,具有抗氧化、增强免疫、参与辅酶Q合成、降低金属毒性等功效。研究表明,硒化修饰能够明显改善中草药多糖的生物活性或产生新的药用价值,其合成产物-硒化多糖具有重要的研究价值和应用前景。新疆乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)作为新疆地区的道地药材,具有健脾补气、清热解毒等功效。目前认为新疆乌拉尔甘草多糖(Glycyrrhiza uralensis Fisch polysaccharide,GUP)是新疆乌拉尔甘草发挥生物学功效的主要物质基础之一。本研究从新疆乌拉尔甘草中提取多糖(GUP),对其进行硒化修饰,其次对硒化新疆乌拉尔甘草多糖(the selenzing polysaccharide,SeGUP)的结构、抗氧化活性、抗炎活性及免疫调节进行系统研究。目的:旨在硒化修饰有助于改善新疆乌拉尔甘草多糖(GUP)的生物活性,为研制兼具抗炎免疫作用和补硒作用的兽用制剂及补硒饲料添加剂提供理论依据。方法:1.以新疆乌拉尔甘草为研究对象,采用水提醇沉法提取粗多糖,通过去蛋白,去色素,层析柱等纯化方法得到GUP。采用HNO_3-Na_2SeO_3法制备SeGUP,并分析其体外抗氧化活性。2.为探索SeGUP的抗炎作用,本研究构建以局部肿胀、白细胞游走、毛细血管通透性改变为特征急性炎症模型和以肉芽组织增生为特征的慢性炎症模型,建立LPS诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7体外炎症模型,研究了SeGUP对RAW264.7细胞的细胞因子及其对NF-?B和MAPKs信号转导通路的影响。3.建立完全弗氏佐剂型关节炎大鼠(AA)模型,以足趾肿胀程度、大鼠体重、免疫器官指数和血清炎症因子水平作为评价指标,考察SeGUP体内抗类风湿性关节炎的药效。4.通过测定各组小鼠免疫器官指数、碳廓清指数、血清溶血素、T淋巴细胞增殖和TNF-?,IL-4,IFN-γ的含量,探讨SeGUP对免疫抑制小鼠免疫调节作用的影响。5.探讨SeGUP对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响,并从细胞免疫、体液免疫、免疫调节因子活性变化方面,研究SeGUP增强雏鸡免疫机能的可能机制。结果:1.GUP经HNO_3-Na_2SeO_3法成功制备SeGUP。紫外光谱和红外光谱鉴定SeGUP中含有O-Se-O,而糖环结构的构型基本不变。发现SeGUP的热稳定性、电子粒径和分子量明显不同于GUP。在体内外抗氧化试验中,SeGUP体现出相比GUP更强的抗氧化活性。2.SeGUP(300mg/mL)能够显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,显著抑制角叉菜胶致小鼠足肿胀,显著降低醋酸致小鼠毛细血管通透性,显著抑制棉球致肉芽组织增生。SeGUP(80μg/mL)能够抑制TNF-?、IL-6和IL-1?分泌,并呈现剂量依赖性。还能抑制NO和PGE_2合成。SeGUP抑制了LPS刺激的小鼠RAW 264.7巨噬细胞NF-?B和MAPKs蛋白表达,其作用呈剂量依赖方式。3.SeGUP(200 mg/kg)可使AA大鼠足趾肿胀程度显著下降;恢复其体重,降低胸腺和脾脏指数以及血清炎症因子水平。4.SeGUP(200 mg/kg)可显著增强免疫抑制小鼠的免疫器官指数、碳廓清指数、血清溶血素水平,促进T淋巴细胞增殖,显著提高血清INF-γ、TNF-?和IL-4含量。5.体内试验指出,SeGUP组在各时间点能够显著促进淋巴细胞增殖,并显著强于未修饰GUP;SeGUP组在各时间点的抗体效价显著高于免疫对照组,在某些时间点显著高于未修饰GUP组。结论:综上所述,新疆乌拉尔甘草多糖经分子修饰后,生物活性发生了极大的改变。同等剂量的SeGUP的抗炎和免疫调节效果优于GUP,表明硒化修饰提高GUP的抗炎和免疫调节作用。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S853.74

【参考文献】
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