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《石河子大学》 2005年
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绵羊卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育影响因素的研究

万鹏程  
【摘要】:本研究着重探讨和研究了绵羊体外受精各技术环节当中一些因素对绵羊体外受精整个过程的影响,初步建立了一套比较完善的操作体系。 剖切法相比抽吸法可以在耗时相对较短的情况下获取较多的可用卵母细胞(6.77枚/卵巢和4.08枚/卵巢),同时其卵母细胞的总体质量也要高于后者。 在绵羊体外成熟试验中,(1) 采用微滴法与聚堆法对绵羊卵母细胞的体外成熟率分别为78.6%和82.5%,差异不显著(p0.05)。(2) 培养基不添加FCS和添加FCS组间卵母细胞成熟率差异极显著(p0.01);而添加10%、15%和20%的FCS时,卵母细胞成熟率随FCS添加量的增加而逐渐上升,但各组间差异不显著(p0.05)。同时,随着培养时间(18~36h)的延长,成熟率有逐渐上升的趋势。(3) 不添加17β-E_2与添加17β-E_2组的各组间差异极显著(p0.01)。添加10μg/ml17β-E_2组则明显低于添加1,2,5μg/ml组,差异极显著(p0.01)。(4) 在培养基中添加FCS与EES对卵母细胞的成熟无显著影响(p0.05)。 采用上游法和Percoll密度梯度离心法处理绵羊精液并进行体外受精培养,得出上游法和Percoll密度梯度离心法的卵裂率分别为64.3%和77.6%,差异显著(p0.01),桑囊率分别为34.4%和46.1%,差异不显著(p0.05)。 为研究EES对绵羊卵母细胞体外受精的影响,在试验中向培养基中添加不同浓度(0,5,10,20%)的EES后,结果说明,不加血清的对照组的受精卵裂率和桑囊率都显著低于血清添加组(P0.01),而添加5%血清组和添加10%和20%的血清组之间的受精分裂率和囊胚率差异显著(P0.05),10%和20%的血清组之间的受精分裂率和囊胚率差异不显著(P0.05)。 实验采用TCM199、M16和SOF三种培养液进行体外受精胚胎的体外发育培养,结果,TCM199培养液的桑葚胚率和囊胚率与M16培养液和SOF培养液相比都有显著差异(P0.05),而M16培养液和SOF培养液的桑葚胚率和囊胚率的差异不显著(P0.05)。 用颗粒细胞共培养,输卵管上皮细胞共培养和成分明确系统的非共培养体系进行体外受精卵的体外发育培养。结果,体细胞共培养系统的桑葚胚率和囊胚率都比非共培养系统的桑葚胚率和囊胚率高,显著差异(P0.05);而颗粒细胞共培养系统桑葚胚率与输卵管上皮细胞共培养系统相比较,桑葚胚率差异不显著(44.7%和48.4%,P0.05),但囊胚率差异显著(37.3%和42.1%,P0.05)。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S826.1

【引证文献】
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【同被引文献】
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