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《石河子大学》 2006年
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脱细胞牛松质骨材料的制备及其体外相容性的初步研究

张永刚  
【摘要】: 理想的骨组织工程支架材料应具有良好的生物相容性、生物降解性、多孔性和一定的机械性能,以利于细胞的粘附、生长、增殖和分化。近年来脱细胞基质材料的制备成为生物衍生材料的研究热点。脱细胞骨细胞外基质是提供细胞粘附、增生和分化的基础,也是将生长因子固定于细胞组分上并维持三维空间结构,允许新的组织生成的支撑物,是良好的骨组织工程支架材料。虽然,一些人对脱细胞的骨细胞外骨架进行了描述,但迄今为止还没有见到较理想的脱细胞骨细胞外基质的制备及骨细胞外基质骨陷窝计量检测的详细报道。实验进行脱细胞骨细胞外基质-脱细胞牛松质骨制备Acellular Bovince Cancellous Bone ;ABCB),去除细胞成分,并进行形态学观察,为骨组织工程的新型天然支架材料提供依据。骨髓基质细胞在体外具有容易培养扩增的特点,在特定的诱导条件下可向多方向分化。因此它具有很广泛的应用价值,但在骨组织工程方面的应用并不多。实验以兔骨髓基质细胞为种子细胞,在体外分离,培养并与脱细胞牛松质骨进行联合培养并观察,为组织工程的新型支架材料提供组织学实验依据。 1.脱细胞牛松质骨材料的制备(Acellular Bovince Cancellous Bone ;ABCB) 新鲜牛肱骨(石河子市屠宰场),上端松质骨,加工为15mm×10mm×3mm的骨块,根据析因设计原理用不同浓度TritonX-10O液分别与高渗和低渗液联合后对牛肱骨上端松质骨块进行适当的脱细胞处理,制成脱细胞牛松质骨(Acellular Bovince Cancellous Bone ;ABCB),再进行HE染,Massion染色及扫描电镜观察。 2.骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells ,BMSCs)的分离,培养及成骨诱导 新西兰大白兔,1月龄,无菌条件下,取双侧股骨及胫骨骨髓,缓缓加人到含有5ml的淋巴分离液的10ml离心管中2000转/分水平离心30分钟,用含20%新生牛血清的低糖DMEM培养基进行吹打,置于37℃,5%C02,饱和湿度条件下培养,3日后更换培养液,待原代骨髓干细胞增殖贴壁成单层后,传代培养。BMSCs在特定的条件下可定向分化为不同的间充质组织细胞。取第3代部分BMSCs ,加入矿化诱导液(含20%胎牛血清、10-8mol/L地塞米松,50μg/ml,维生素C,10mmol/Lβ-甘油磷酸钠的L-DMEM培养液)的DMEM培养基后培养并观察细胞形态,14天后行Von Kossa染色。 3.骨髓基质细胞与脱细胞牛松质骨材料联合培养 无菌条件下,收集第3代骨髓基质细胞并低糖DMEM培养基中制成3x104/ml浓度的细胞悬液,置于消毒备用的5mm×5mm×3mm的ABCB中,利用抽吸作用使细胞充分渗人ABCB孔隙中,在37℃,5%CO2饱和湿度条件下联合培养,8小时后再次加人培养液,其后隔日换液.相差显微镜下观察细胞在ABCB上生长情况,每隔4天测定培养液中蛋白质含量的测定并空白对照组与联合培养组生长曲线,联合培养12天,将
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R318.08

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