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《石河子大学》 2006年
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厚叶旋蒴苣苔(Boea crassifolia)BcWRKY1转录因子基因克隆及其初步功能分析

刘戈宇  
【摘要】: WRKY蛋白主要存在于植物中,是转录因子超家族的重要组成部分。其成员在相当广泛的范围内参与了植物的生长发育、代谢以及生物或非生物胁迫的反应。本研究利用RT-PCR从具有复苏植物特点的厚叶旋蒴苣苔中获得BcWRKY1基因部分cDNA片段,利用RACE技术克隆了BcWRKY1基因全长序列,并对该基因进行序列比对、基因进化和初步的表达效果等分析研究。 BcWRKY1基因cDNA全长为1803bp,编码一个含有444个氨基酸的蛋白质,在此氨基酸序列中含有两个WRKY蛋白保守序列WRKYGQK,锌指模式为C2H2属于WRKY 1亚族。BcWRKY1与其它WRKY成员的同源性低,表明分离到的BcWRKY1是WRKY基因家族的新成员。 将BcWRKY1基因与GENEBANK中的其他WRKY1亚族相关成员进行序列比对的初步基因进化分析结果发现:BcWRKY1基因与烟草的WRKY3基因全长cDNA相似性较高,基因全长相似率为43.7%,5’和3’两个WRKY保守区相似率分别为80%和83%。但使用MEGA软件与同族基因进行同源性分析后发现BCWRKY1基因与甘薯的SPF1基因在3’WRKY保守区同源性最高,为84%。根据ZHANG等所做的WRKY家族蛋白分析后的结论——3’WRKY保守区在WRKY转录因子调控基因表达过程中起重要作用,可以推断BcWRKY1与SPF1属于同一进化世代。 通过Southern杂交检测,初步推断BcWRKY1基因以两个拷贝的形式存在于厚叶旋蒴苣苔基因组中。Northern杂交结果显示,BcWRKY1基因可在受到干旱、低温、高盐等非生物胁迫和SA、JA、MeJA、ABA等信号分子的诱导后表达。且不同诱导条件下的表达效果不同,其中以150mmol/L NaCL处理下反映最为明显。 本试验进一步构建了单双子叶植物的表达载体p3300-35S-Tnos和p3300-ubi-Tnos,将BcWRKY1基因转化到不同种类植物中,希望研究目的基因在不同目标植物体内的表达效果。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q943.2

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【引证文献】
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