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《石河子大学》 2007年
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牛体外成熟卵母细胞与性控精子体外受精的研究

马学海  
【摘要】: 本文研究牛卵母细胞的体外成熟培养、与性别分离精子体外受精及早期胚胎体外培养程序的优化,目的是为建立一套完善的牛性控胚胎体外生产体系,从而为该技术走出实验室,在实践中得以应用提供理论依据。同时为核移植、转基因等胚胎工程后技术的应用奠定基础。 试验一研究牛卵母细胞体外成熟的培养方法,以提高牛卵母细胞的体外成熟率。通过添加不同激素、以及不同血清,比较不同浓度的激素水平,不同血清及其浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响。以期找出在本实验室条件下,牛卵母细胞IVM所需要添加的适宜的激素浓度,血清种类及浓度。为进一步做IVF、IVC打下基础。结果表明,选用胞质均一致密,外围至少有3层以上卵丘细胞包裹的A级卵母细胞。添加10μg/mlFSH、10μg/mlLH、1μg/mlE2,成熟培养22~24h可显著提高卵母细胞体外培养的成熟率;与添加5%血清相比,添加10%的血清成熟效果更好,单独添加10%发情牛血清(OCS)能起到与10%胎牛血清(FCS)在外源激素参与下联合培养同等或者更好的效果。说明在牛细胞培养液中只添加10%OCS而不使用激素是完全可行的,在相同效果的前提下可大大降低成本。 试验二研究不同精子获能添加物、不同精子密度、不同精子获能液对性别分离精子IVF的影响。目的是优化性控精液体外受精条件,筛选出简便、高效的获能处理方法。为提高体外成熟卵母细胞的受精质量和数量提供理论基础。研究表明受精液中同时添加一定浓度的肝素(l0μg/ml)与咖啡因(5mM),能较好地促进牛分离精子体外获能与受精;精子密度在1.0×106个/ml左右比较适合牛分离精子IVF;用BO液和TALP液对牛性控精子进行获能和受精处理,其受精效果差异不显著(P0.05),但BO液对早期胚胎的发育影响较小。 试验三通过优化培养程序,筛选培养液,以建立适合牛胚胎体外发育的培养体系。通过对共培养体系、不同早期胚胎培养液及分离精子和未分离精子IVF的研究表明,在牛早期胚胎培养过程中,在共培养条件下基础培养液选用配制简单的SOF或CR1,添加一定量的BSA,可获得较高的囊胚发育率和卵裂率。颗粒细胞与输卵管上皮细胞间对胚胎的发育并没有显著差异(P0.05),但两组均显著优于非共培养体系(P0.05)。分离精子和未分离精子在共培养条件下的体外受精效果表明,两者的卵裂率和囊胚率差异不显著(P0.05),但未分离精子体外受精效果稍好于分离精子。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S823

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【引证文献】
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