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小鼠脂肪源间充质干细胞在体外对造血功能影响的研究

宋丽娟  
【摘要】:目的:探讨小鼠脂肪源间充质干细胞对造血干/祖细胞体外扩增的影响并对其机制进行初步研究。方法:无菌条件下获取C57BL/6小鼠的脂肪源干细胞(ADSCs),培养至P3代:①细胞形态学分析;②流式细胞术检测细胞表面免疫表型;③脂肪源干细胞定向成骨、成脂细胞诱导。将小鼠成纤维细胞、骨髓间充质干细胞、成骨诱导前后的脂肪源干细胞经丝裂霉素C处理后作为滋养层,以骨髓单个核细胞(BMNCs)作为长期培养起始细胞(LTC-IC),对其进行35天长期体外共培养,将本实验分4组:A组:BMNCs加小鼠成纤维细胞,B组:BMNCs加骨髓间充质干细胞(BMSCs),C组:BMNCs加ADSCs,D组:BMNCs加成骨诱导后的脂肪源干细胞(osteo-ADSCs);分别于0d、14d、28d、35d行甲基纤维素14d短期处理分析造血干/祖细胞集落增殖状态;同时应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中的基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、N-钙黏素(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Jagged1蛋白(JAG1)的表达情况。结果:1. ADSCs的生物学分析:ADSCs在体外呈梭形生长并可稳定传代;成骨、成脂诱导均为阳性;流式结果分析:CD29高表达(95.37±0.95)%;CD34低表达(8.7±0.4)%。2.细胞体外二维共培养后对造血干/祖细胞(HSPCs)扩增的影响:①不同时间点造血干/祖细胞(HSPCs)形成的集落数不同,且成骨诱导后的脂肪源干细胞更具有造血支持作用;②SDF-1、N-cadherin、β-catenin、JAG1的表达情况在不同时间点不同,SDF-1、β-catenin的表达结果显示:C、D组表达明显高于A、B两组(P 0.05);且C组与D组比较有统计学意义(P0.05);而N-cadherin、JAG1在各组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论: C57BL/6小鼠的脂肪源干细胞及成骨诱导后的脂肪源干细胞在体外可有效地刺激造血。


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