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瘤果黑种草子总皂苷提取工艺及免疫调节活性研究

阿米热·艾则孜(Almire·Aziz)  
【摘要】:目的:研究瘤果黑种草总皂苷的双水相提取工艺,对其进行抗氧化及免疫调节活性的研究。方法:(1)以黑种草皂苷A为检测指标,在单因素实验的基础上,采用响应面分析法优化双水相提取瘤果黑种草总皂苷的最佳工艺;通过大孔树脂纯化瘤果黑种草总皂苷。(2)采用反相硅胶和Sephadex LH-20分离纯化瘤果黑种草总皂苷中的有效成分,并通过NMR等波谱技术结合理化性质鉴定有效成分的化学结构。(3)采用DPPH、超氧阴离子清除能力及还原能力测定考察瘤果黑种草总皂苷的抗氧化活性。(4)采用环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠实验模型评价瘤果黑种草总皂苷的免疫调节活性。结果:(1)响应面分析法优化瘤果黑种草总皂苷双水相提取的最佳工艺为:料液比1:39,硫酸铵用量0.35g/mL,乙醇浓度47%,在此条件下黑种草皂苷A得率为3.15%;进一步通过大孔树脂树脂纯化,使其有效部位含量达到了50%以上。(2)从瘤果黑种草总皂苷中分离得到3个化合物,并鉴定了它们的化学结构:常春藤皂苷元3-O-?-D-吡喃木糖基-(1→3)-?-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-?-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-?-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-?-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-?-D-吡喃葡萄糖酯苷(1,黑种草皂苷A),常春藤皂苷元3-O-?-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-?-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-?-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-?-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-?-D-吡喃葡萄糖酯苷(2)和常春藤皂苷元3-O-?-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-?-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-?-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-?-D-吡喃葡萄糖酯苷(3)。(3)瘤果黑种草总皂苷具有较好的还原能力,清除DPPH自由基和超氧阴离子能力。(4)中、高剂量的瘤果黑种草总皂苷能明显增加免疫低下小鼠的脾脏指数和胸腺指数,改善TNF-?和INF-γ的水平(P0.05)。结论:瘤果黑种草总皂苷双水相提取工艺,操作简单、无污染,适合工业化生产;该有效部位具有较好的抗氧化及免疫调节作用;结果可为瘤果黑种草子药材及其总皂苷有效部位的开发利用提供依据。


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