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《新疆师范大学》 2017年
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南疆传统发酵酸奶微生物多样性及其乳酸菌生物被膜的研究

西热娜依·阿布力克木  
【摘要】:本研究以阿图什和乌什县传统发酵酸奶为研究对象,采用高通量焦磷酸测序技术,评估酸奶中微生物种群结构及三种培养基上可培养微生物多样性。基于传统培养技术、96孔微量板法,分离筛选酸奶中可产生生物膜的优良菌株。最后采用生理生化试验及16S rDNA序列分析法鉴定可产生生物膜的乳酸菌。基于十份阿图什及乌什传统发酵酸奶,通过测序拼接得到的细菌有效序列为165201条,真菌有效序列为407365条。在16S rRNA门水平上,从10个样本共检测出7个菌门,厚壁菌门是优势菌门,其次为变性菌门;共测出43个属,其中乳杆菌属及链球菌属为优势菌属。在ITS测序门水平上,从10个样品中共测出5个菌门。样品A4具有80.08%丰富度的子囊菌门和10.87%的担子菌门。U7里测出53.97%的接合菌门和46.03%的子囊菌门。其他八个样品中优势菌门都是子囊菌门,丰度为97.33-99.95%。在属水平上,共测出43个真菌属,其中Kluyveromyces、Saccharomyces为优势菌属。分析三份阿图什和一份乌什传统发酵酸奶在MRS、YGC及Lee氏三种培养基上可培养微生物群落多样性。结果发现,厚壁菌门和子囊菌门在各样品中均占绝对优势,担子菌门、接合菌门和变性菌门广泛存在于各样品中,不过含量较少。基于16S rRNA属水平上在1号样品里乳杆菌属为绝对优势菌属,3、7号样品中乳杆菌属、链球菌属及醋酸杆菌属为主,其中乳杆菌属占优势。基于ITS属水平上,四个样品均为Saccharomyces和Kluyveromyces为主,AM1、AM3、UM7、AL4样本相比于其他样本丰富度较高,发酵酸奶中还测出低丰度的Sebacina、Mortierella、Aspergillus、Candida、Alternaria等菌属。基于传统培养法,从四份样品中共分离到57株乳酸菌和78株酵母。通过96孔微量板定量检测法对57株菌进行生物膜形成能力检测,结果显示,其中37(73.68%)株菌能产生生物膜,其中16(28.07%)株归属于强黏附成膜菌、22(38.59%)株归属于中等强度黏附成膜菌、其他19株菌归属于不粘附成膜菌。采用扫描电子显微镜,对强黏附成膜乳酸菌代表菌株,中等强度黏附成膜乳酸菌代表菌株及不黏附成膜乳酸菌代表菌株进行电镜拍照。结果显示,强黏附成膜乳酸菌菌落相互聚集,表面细菌密集,菌落增厚,聚集成团,形成大块的生物膜。中等强度黏附成膜乳酸菌中,少部分开始粘附并聚集,包裹在代谢产物中,菌落之间间隙较大。而不黏附成膜菌,菌细胞粘附很少,与中等强度和强黏附成膜乳酸菌相比具有显著的差异。对可产生生物膜的菌株进行生理生化试验、16S rDNA序列分析。结果显示,所测38株菌均为过氧化氢酶阴性,硝酸盐还原试验阳性,均不能利用山梨醇及鼠李糖、都能利用葡萄糖产酸可不产气,均不能水解木糖;除了23、37、M65、L20、120等菌株不能利用乳糖,其他菌株对乳糖水解能力较强;除了76号菌不能利用蔗以外糖其他菌株对蔗糖、果糖水解能力较强等。16S rDNA序列分析结果显示,可产生生物膜菌株共有3个6个种,其中15株为Enterococcus.durans、3株Enterococcus.Faecium、7株Enterococcus.Thailandicus、2株为Enterococcus.Lactis、6株为Lactobacillus.Plantarum、5株为Streptococcus.Thermophilus,其中肠球菌(Enterococcus)为优势菌属,其次为乳杆菌属(Lactobacillus)和链球菌属(Streptococcus)。
【学位授予单位】:新疆师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:TS252.54

【参考文献】
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