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《湖北科技学院》 2019年
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心肌靶向槲皮素纳米给药系统制备及抗氧化作用

赵丹  
【摘要】:目的:制备新型纳米给药系统(心肌靶向肽@槲皮素@介孔羟基磷灰石,PCM@QUE@MHAs),并研究其对心肌细胞的抗氧化作用。方法:采用合成法制备介孔羟基磷灰石(MHAs),MHAs通过介孔中的氢键吸附槲皮素(QUE),再通过表面的羟基与靶向肽(PCM)结合,制备得PCM@QUE@MHAs。采用透射电镜,动态光散射仪和Zeta电位分析仪对纳米给药系统进行表征。建立QUE体外高效液相色谱法(HPLC)分析方法,并通过HPLC在体外考察纳米粒的释药行为。以H9c2心肌细胞作为模型细胞,建立H_2O_2心肌损伤模型,采用MTT实验测定纳米给药系统的细胞毒性,采用细胞内活性氧探针(DCFH-DA)检测细胞内ROS的含量。结果:PCM@QUE@MHAs的TEM平均粒径为185.2±5.9 nm,Zeta电位为-16.5±2.9 mV,负载量为25.2%。稳定性实验表明纳米粒的粒径基本没有变化。通过HPLC法测定QUE浓度,色谱峰的峰形较好,线性关系和精密度良好,符合要求。2 h内,QUE@MHAs和PCM@QUE@MHAs中的QUE的累积释放量分别为59.7%和50.3%。细胞实验表明,MHAs在浓度为5μg/mL时,与H9c2细胞共培养24 h和48 h,其细胞存活率达到95.1%,MHAs在浓度为100μg/mL时,H9c2细胞的存活率达到79.0%。此外,制备的QUE@MHAs和PCM@QUE@MHAs与H9c2细胞共培养24 h和48 h,其细胞存活率均高于90.0%。采用H_2O_2(500μmol/L)处理细胞,建立细胞损伤模型,PCM@QUE@MHAs可使细胞存活率从42.3%增加为85.8%。采用细胞内活性氧探针(DCFH-DA)检测细胞内ROS的含量。PCM@QUE@MHAs可使细胞体内的DCF平均荧光强度从3557降低为390。结论:本文制备的纳米粒(PCM@QUE@MHAs)粒径均一,负载量较高,并具有较好的稳定性。同时,QUE的HPLC色谱峰峰形较好,灵敏度符合要求,线性关系和精密度良好,符合要求。PCM@QUE@MHAs能减缓药物的释放。MHAs具有良好的生物相容性,可以用于药物输送,安全性较高。同时,PCM@QUE@MHAs对正常细胞无毒副作用。PCM@QUE@MHAs可显著提高细胞存活率,对细胞氧化应激损伤有改善作用。PCM@QUE@MHAs可显著性降低受损心肌细胞(H_2O_2处理)内ROS的含量,从而保护受损的心肌细胞。该研究将为纳米给药系统抑制心肌损伤提供理论依据,并为其临床应用提供实验依据。
【学位授予单位】:湖北科技学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R943

【参考文献】
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