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骨髓间充质干细胞移植对急性肝损伤的治疗作用与NF-κB和CUGBP1的表达

卞晶晶  
【摘要】:目的观察骨髓间充质干细胞(Bone morrow stem cells,BMSCs)移植对急性肝损伤小鼠的治疗作用,研究通过静脉移植的BMSCs在急性肝损伤小鼠肝组织内的分布和迁移特点,并探讨其促修复作用的转录激活和m RNA剪接机制。方法雌性昆明种小鼠42只,随机分为正常对照组、损伤模型组和干细胞移植组。分离同种小鼠BMSCs,体外扩增、Brd U标记后经尾静脉注入以40%CCl4一次性灌胃制备的急性肝损伤小鼠体内。于灌胃后第5天、第10天、第15天分别取损伤模型组和干细胞移植组小鼠的肝脏,正常对照组不做处理,直接取肝脏,各组均制备石蜡切片和冷冻切片,并留取新鲜组织,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织的结构变化,免疫组织化学染色追踪Brd U阳性标记干细胞在肝组织内的迁移和分布情况,免疫组织化学染色及Western Blot技术检测肝组织中转录因子NF-κB、RNA结合蛋白CUGBP1的表达情况。结果(1)HE染色结果显示,干细胞移植组第5、第10、第15天肝组织的修复状态明显好于损伤天数相同的损伤模型组小鼠;干细胞移植组第15天时肝组织已接近正常。(2)免疫组化结果可见干细胞移植组小鼠在CCl4灌胃后第5天时肝组织内散在分布着大量的黄色或褐色的Brd U阳性细胞胞核。干细胞移植组第10天Brd U阳性细胞核的数量较同组第5天时少。干细胞移植组第15天受体鼠肝组织内Brd U阳性细胞胞核数明显减少。(3)NF-κB和CUGBP1蛋白的检测,免疫组化结果显示:正常对照组小鼠NF-κB和CUGBP1在胞浆浅表达或不表达,损伤模型组和干细胞移植组NF-κB和CUGBP1蛋白的表达均较正常对照组增高;干细胞移植组小鼠NF-κB和CUGBP1蛋白的表达强度均较同时间点的肝损伤模型组要弱,差异均有显著性(P0.05)。同时间点损伤模型组和干细胞移植组NF-κB蛋白的表达均较CUGBP1强。Western blot结果显示:与正常对照组相比,损伤模型组和干细胞移植组小鼠肝组织中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达水平均增高,与同时间点的损伤模型组相比,干细胞移植组小鼠肝组织中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达水平均降低,干细胞移植组与损伤模型组同时间点之间差异均具有显著性(P0.05)。结论经静脉移植的BMSCs可以迁移至急性肝损伤小鼠肝脏,并对损伤肝脏有修复作用,随着时间的延长单位面积内BMSCs的数量有减少。干细胞移植对急性肝损伤的治疗作用可能与下调转录因子NF-κB和RNA结合蛋白CUGBP1的表达有关,推测干细胞移植可能通过抑制NF-κB的核转录激活和RNA结合蛋白CUGBP1的表达,减轻炎症反应和稳定m RNA而发挥对损伤肝脏的促修复作用的。


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