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糖尿病患者血清对人脐带血间质干细胞增殖及凋亡的影响

王晓慧  
【摘要】:目的:目前干细胞移植治疗糖尿病的效果有争议。为探明干扰干细胞治疗糖尿病的原因,本研究探索糖尿病患者血清因素对人脐带血间质干细胞增殖及凋亡的影响。材料和方法:医院内分泌科获得糖尿病人血清。医院妇产科获取脐带血,分离单个核细胞;体外贴壁培养法培养扩增、纯化人脐带血间质干细胞(hUCB-MSCs)。流式细胞仪鉴定干细胞的纯度。选择第3代的人脐带血间质干细胞(hUCB-MSCs)分别加入高浓度葡萄糖、亮氨酸、高浓度葡萄糖加亮氨酸、正常人和糖尿病患者血清、正常人和糖尿病患者灭活补体血清、补体抑制剂Pmx-53处理糖尿病患者血清孵育人脐带血间质干细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。’Western Blot检测凋亡相关蛋白puma、Bcl-2、 Bax、caspase3以及caspase9的表达,荧光素报告基因检测对细胞翻译功能的影响。荧光素报告基因检测细胞翻译功能。实验结果:1.高浓度葡萄糖、亮氨酸和高浓度葡萄糖结合亮氨酸对人脐带血间质干细胞增殖活性的影响无显著性差异。2.灭活补体的糖尿病人血清与正常人血清对hUCB-MSCs增殖活性的影响无差异显著性。 3.未灭活补体与灭活补体的正常人血清相比,对hUCB-MSCs增殖活性的影响无显著性差异。4.与灭活补体的糖尿病患者血清相比,未灭活补体的糖尿病人血清抑制hUCB-MSCs增殖的作用更显著。5.与未灭活补体的正常人血清组相比,未灭活补体的糖尿病人血清明显抑制hUCB-MSCs的增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞周期、抑制蛋白质翻译以及翻译相关报告基因的表达。6.加入补体抑制剂pmx-53处理的未灭活补体糖尿病患者和正常人血清孵育hUCB-MSCs可见,加入补体抑制剂处理后能够逆转糖尿病人血清中补体对干细胞增殖以及凋亡的影响。而补体抑制剂pmx-53处理正常人血清对hUCB-MSCs增殖影响与未处理的正常人血清相比,差异无显著性。实验结论:1.高浓度葡萄糖和高浓度亮氨酸对人脐带血间质干细胞增殖活性无显著影响。 2.未灭活的糖尿病人血清明显抑制人脐带血间质干细胞增殖和细胞周期、促进细胞凋亡、抑制细胞的翻译功能。 3.补体抑制剂pmx-53能够逆转糖尿病血清中补体对干细胞抑增殖和促凋亡的作用。


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