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《青岛大学》 2018年
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CXXC5表达变化对MLFs分化及CD40/CD40L通路的影响

冯爱然  
【摘要】:目的:调节CXXC5的表达,明确CXXC5对小鼠肺成纤维细胞(MLFs)的增殖、凋亡作用,以及CXXC5对MLFs分化及CD40/CD40L通路的影响。加入TGF-β1刺激后,调节CXXC5的表达,明确CXXC5及TGF-β1对MLFs分化及CD40/CD40L信号通路的共同作用。方法:构建腺病毒表达载体:只含荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)、带有目的基因CXXC5的荧光蛋白腺病毒载体(Ad-CXXC5)、靶向CXXC5的特异性shRNA腺病毒载体(Ad-shR-CXXC5)。将实验分为8个小组,组织贴壁法培养MLFs,用腺病毒感染各组对数生长期的细胞,探索最佳MOI值。CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖率、凋亡率。ELISA检测各组细胞培养上清液中Col1aI,Col1aIII,s CD40L的表达。RT-qPCR及Western Bot检测各组细胞CXXC5,proCol1aI,proCol1aIII,α-SMA,CD40,CD40L mRNA及蛋白的表达。结果:48小时三种病毒感染MLFs的最佳MOI值均为100。CXXC5表达上调后,与对照组相比,细胞的增殖活性减低(P0.05),CXXC5表达下调后,细胞的增殖活性增加(P0.05);应用TGF-β1刺激后,细胞的增殖活性增加,进一步上调CXXC5后,细胞的增殖活性较TGF-β1组下降(P0.05),下调CXXC5后细胞的增殖活性增加(P0.05)。上调CXXC5后,较对照组而言,细胞的凋亡增加(P0.05),下调CXXC5后,较对照组细胞的凋亡减少(P0.05);TGF-β1刺激后,TGF-β1+Ad-GFP组较Ad-GFP组细胞的凋亡减少,TGF-β1刺激并上调CXXC5后,细胞的凋亡较TGF-β1+Ad-GFP组增多(P0.05),TGF-β1刺激并下调CXXC5后,细胞的凋亡较TGF-β1+Ad-GFP组减少(P0.05)。上调CXXC5后,细胞上清液中Col1aI、Col1aIII、sCD40L等表达减少,下调CXXC5后细胞上清液中Col1aI、Col1aIII、sCD40L表达增加。下调CXXC5后,测得CXXC5 mRNA的表达减少,而proCol1aI、proCol1aIII、α-SMA、CD40、CD40L的m RNA及蛋白表达增加;上调CXXC5后,proCol1aI、proCol1aIII、α-SMA、CD40、CD40L的mRNA及蛋白表达减少。应用TGF-β1刺激细胞后,proCol1aI、proCol1aIII、α-SMA、CD40、CD40L等的mRNA及蛋白表达较未刺激组表达增加。结论:(1)CXXC5可以促进MLFs细胞凋亡,抑制其增殖。(2)CXXC5可抑制小鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化。(3)CXXC5抑制TGF-β1对小鼠肺的促纤维化作用。(4)CXXC5通过负反馈调节CD40/CD40L信号通路,调节肺纤维化的形成。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R363

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