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《烟台大学》 2010年
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马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)生殖腺多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性研究

牛宗亮  
【摘要】:马粪海胆(Hemicentrous pulcherrimus),属于棘皮动物门(Echinodermata),海胆纲(Echinoidea),是中国及日本沿海的特有品种,主要分布在我国黄渤海沿岸、浙江、福建沿海以及日本。本论文以黄海海域马粪海胆生殖腺作为实验材料,首先对其进行了全面的营养物质测定,之后研究了马粪海胆生殖腺粗多糖(crude polysaccharide from the gonad of Hemicentrous pulcherrimus, HpcPS)提取工艺,并对其多糖的提取、分离纯化、以及粗多糖抗肿瘤活性进行了研究,为马粪海胆资源的开发利用提供必要的数据支持和理论依据。 对采自黄海海域的马粪海胆生殖腺的营养成分(水分、灰分、蛋白质、总糖、粗脂肪、脂肪酸、氨基酸、无机元素)分析,结果显示马粪海胆生殖腺水分含量64.20%,灰分含量12.70%,蛋白质含量12.25%,总糖含量5.59%,粗脂肪含量2.34%。脂肪酸成分中花生四烯酸和EPA含量较高。无机元素中Ca、Mg、Fe等营养元素含量较高。分析结果表明马粪海胆生殖腺富含蛋白质、多种无机元素和不饱和脂肪酸,具有良好的食用保健开发利用前景。 采用L9(34)正交实验,以HpcPS得率为指标,研究提取温度、提取时间、料水比、提取次数4个因素对HpcPS提取工艺的影响。以正交实验的实验条件和HpcPS得率为自变量和因变量建立多元线性模型,所得到的统计参数分别为R=0.922,F=2.854,并用所建立的线性模型预测两个实验条件的多糖得率,得到满意的结果,说明此模型可以用于多糖得率的预测。 采用了传统的水提法和碱提法提取多糖,去除蛋白质后分级沉淀,得到HpcPS,取碱提70%醇沉多糖进行超滤、过DEAE-纤维素阴离子交换柱,得到马粪海胆生殖腺多糖(polysaccharide from the gonad of Hemicentrous pulcherrimus, HpPS),使用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)法检测其纯度和分子量,结果表明得到的多糖分子量为32.494 kD的纯品多糖。 对碱提得到的粗多糖进行了体内和体外的抗肿瘤活性实验。体外采用噻唑蓝(MTT)法检测碱提HpcPS对人肝癌细胞株SMMC-7721和人肺腺癌细胞株A549细胞毒作用,结果显示碱提HpcPS对人肝癌细胞株SMMC-7721具有较强的抑制作用而对人肺腺癌细胞株A549则没有明显抑制作用,表明马粪海胆生殖腺碱提多糖抗肿瘤活性具有一定的选择性。体内试验将碱提HpcPS对分别接种了H22肝癌和Lewis肺癌的昆明小鼠进行了10d的注射给药,以探讨其抗肿瘤活性,结果表明碱提HpcPS对小鼠移植性肿瘤(H22肝癌和Lewis肺癌)生长均无明显抑制作用。
【学位授予单位】:烟台大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:TQ464;R284

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【参考文献】
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