收藏本站
《扬州大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

GH和IGF-I对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的调节作用机制

季昀  
【摘要】:本研究以奶牛乳腺上皮细胞为材料,采用乳腺上皮细胞体外分离培养技术、细胞分子生物学相关技术,研究了生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对乳酪蛋白合成、乳蛋白合成调节关键激酶和调节因子基因表达以及细胞增殖与凋亡的影响。 试验一、体外分离培养了奶牛乳腺上皮细胞并鉴定其是否表达生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-IR)。从泌乳荷斯坦奶牛活体采集乳腺组织,利用胶原酶消化分离培养奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学、特异性蛋白(角蛋白-18)表达、特异性基因(CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3)表达鉴定纯化后的奶牛乳腺上皮细胞。免疫荧光化学法鉴定角蛋白-18的表达,RT-PCR法鉴定四种酪蛋白基因CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3以及两种受体基因GHR、IGF-IR的表达。结果发现,分离纯化后的乳腺上皮细胞呈典型的铺路鹅卵石样,能够特异性表达角蛋白-18和四种酪蛋白基因,同时检测到了GHR和IGF-IR的表达,细胞冻存再复苏后有较高的成活率。结果表明,本研究成功分离并获取了高纯度的奶牛乳腺上皮细胞且冻存后能够用于后续的试验,GH可能通过直接或间接通过IGF-Ⅰ作用于奶牛乳腺上皮细胞上相应的受体来发挥作用。 试验二、测定了GH和IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞K-酪蛋白基因表达与蛋白合成的影响。对照组为无血清生长培养基,处理组在对照组的基础上添加GH (100ng/mL)、IGF-I (100ng/mL)或GH (100ng/mL)+IGF-I (100ng/mL),细胞培养24h后,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法测定K-酪蛋白基因(CSN3)的相对表达量,ELISA法测定K-酪蛋白合成量。结果发现,GH和IGF-Ⅰ单独或联合添加到无血清生长培养基中均能显著提高CSN3基因表达量(P0.05),蛋白水平的测定结果与基因表达有类似的趋势,但与对照组差异不显著(P0.05),此外,无论是在基因表达水平还是蛋白水平都没有观察到GH和IGF-Ⅰ的累积效应。结果表明,添加100ng/mL的GH或IGF-Ⅰ处理乳腺上皮细胞24h对κ-酪蛋白的合成有一定促进作用。 试验三、测定了GH和IGF-Ⅰ对参与乳蛋白合成调节过程中的关键激酶和调节因子的基因表达的影响。试验处理方式同试验二,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法测定Janus激酶2(JAK2)、信号转导子与转录激活子5(STAT5)、E74-样转录因子5(ELF5)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR核糖体蛋白S6激酶1(rpS6K1)、真核生物起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、真核生物起始因子4E(eIF4E)、真核生物延伸因子2(eEF2)基因的相对表达量,进一步利用Western blot法在蛋白水平测定了mTOR的表达量。结果发现,与对照组相比,单独添加GH有提高ELF5基因mRNA表达量的趋势(P0.1),而单独添加IGF-Ⅰ显著促进了rpS6K1mRNA以及mTOR的表达量(P0.05),但GH没有进一步加强IGF-Ⅰ的这种作用。结果表明,GH和IGF-I可能单独通过影响调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子的基因表达来调节K-酪蛋白的合成。 试验四、测定了GH和IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。细胞处理方式同试验二,采用CCK-8法测定4-96h内奶牛乳腺上皮细胞的增殖情况,用FITC-AnnexinV/PI双染法检测24h内细胞凋亡率,同时用RT-qPCR法测定了IGFBP-5基因的相对表达量。结果发现,补充GH没有促进乳腺细胞的增殖(P0.05),而补充IGF-I在4~6h有显著促进增殖的效果(P0.05),同时补充GH和IGF-Ⅰ在4-96h内都显著促进了乳腺上皮细胞的增殖(P0.05)且与IGF-I组差异不显著(P0.05)。补充GH和IGF-I显著减少了凋亡晚期的细胞数(P0.01)和总凋亡数(P0.05),联合添加GH和IGF-I显著降低了凋亡晚期和总凋亡细胞数(P0.01),其机理可能与GH和IGF-I抑制IGFBP5的表达量有关。结果表明,GH和IGF-I可通过促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖、抑制奶牛乳腺上皮细胞的凋亡来调节乳腺上皮细胞数量和活性,进而促进泌乳。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:S823

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 王秀美;侯先志;高爱武;考桂兰;高民;李大彪;兰儒冰;张楠;张艳明;黄清瑞;;奶牛乳腺上皮细胞的二维和三维培养及培养后酪蛋白基因的表达[J];动物营养学报;2012年06期
2 卢德勋;;反刍动物葡萄糖营养调控理论体系及其应用[J];畜牧与饲料科学;2010年Z1期
3 韩亚南;侯先志;考桂兰;王秀美;杨金丽;高爱武;杨银芬;赵青;高民;;奶牛乳腺上皮细胞不同代数对乳蛋白基因表达的影响[J];中国农学通报;2012年11期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱文奇;李慧芳;宋卫涛;王强;张静;;禽类催乳素基因的研究概况[J];家禽科学;2009年06期
2 侍方方;李苏宜;邵棋;;生长激素联合氟尿嘧啶对生长激素受体不同表达胃癌细胞株的影响[J];肠外与肠内营养;2009年05期
3 方富贵;章孝荣;;胰岛素样生长因子系统对生殖影响研究进展[J];动物医学进展;2009年05期
4 弓超;王凌云;周欢敏;;牛乳腺上皮细胞体外分离和培养[J];动物医学进展;2011年07期
5 张吉鹍;邹庆华;王金芬;熊立根;;稻草与多水平苜蓿混合瘤胃体外发酵组合效应的整体研究[J];饲料工业;2011年17期
6 郭冬生;彭小兰;夏维福;;反刍动物葡萄糖代谢与营养研究进展[J];广东农业科学;2011年08期
7 陈蔚,刘戈力;生长激素与儿童骨发育[J];国外医学(内分泌学分册);2000年01期
8 张养东;王加启;赵圣国;卜登攀;;2008-2009年反刍动物营养研究进展Ⅲ.蛋白质营养[J];中国畜牧兽医;2010年03期
9 刘晗璐;李丹丽;李光玉;刘凤华;孙伟丽;钟伟;;冬毛期降低蛋白质水平对乌苏里貉生产性能及毛皮品质的影响[J];中国畜牧兽医;2011年01期
10 赵静雯;赵圣国;孙鹏;胡小丽;;奶牛乳蛋白源前体物生成与利用的相关影响因素[J];中国畜牧兽医;2012年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 李喜艳;王加启;魏宏阳;卜登攀;胡菡;周凌云;;反刍动物乳腺氨基酸的吸收与代谢[A];首届中国奶业大会论文集(上册)[C];2010年
2 黄遂柱;戴克戎;汤亭亭;;生长激素治疗绝经后骨质疏松症的实验研究[A];全国老年骨质疏松专题学术研讨会论文汇编[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王晓光;饲草型全混日粮饲用价值评价研究[D];内蒙古农业大学;2011年
2 薛树媛;灌木类植物单宁对绵羊瘤胃发酵影响及其对瘤胃微生物区系、免疫和生产指标影响的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
3 贺小英;利用重组腺病毒介导人端粒酶催化亚基(hTERT)制备牛乳腺细胞体外模型的研究[D];西北农林科技大学;2011年
4 周苗苗;奶牛乳腺中小肽的摄取及其在乳蛋白合成中的作用[D];浙江大学;2011年
5 张敏;蛋鸽就巢内分泌机制及其营养调控研究[D];浙江大学;2011年
6 赵胜军;不同氨基酸模式对绒山羊皮肤氨基酸利用的影响及机理[D];内蒙古农业大学;2004年
7 苏鹏程;不同代谢葡萄糖水平日粮条件下白绒山羊体内蛋白质(氨基酸)分配规律的研究[D];内蒙古农业大学;2004年
8 庄洪;骨康对骨质疏松性骨折愈合过程Ⅰ、Ⅱ型胶原及CTGF表达的影响[D];广州中医药大学;2005年
9 朱蓉;牙鲆eIF2α激酶基因HRI和PKR的克隆、表达及功能分析[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2006年
10 赵锋;小鼠乳腺中胰岛素样生长因子家族的表达和作用[D];东北农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姜峰;过瘤胃产品包被技术的研究[D];山东农业大学;2010年
2 李鹏;日粮能氮瘤胃释放同步化及能量、蛋白水平对荷斯坦奶牛日粮氮利用效率影响的研究[D];山东农业大学;2011年
3 季华;籽鹅产蛋性状候选基因多态性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
4 肖春来;产瘫患儿上肢骨骼畸形的临床研究[D];河北医科大学;2011年
5 李喜艳;奶牛乳腺上皮细胞中赖氨酸蛋氨酸配比模式对酪蛋白合成的影响及机理研究[D];中国农业科学院;2011年
6 鲍宏云;过瘤胃保护维生素A对奶牛瘤胃发酵、产奶性能及免疫功能的影响[D];内蒙古农业大学;2011年
7 杨苗;奶牛乳腺上皮细胞低温保存与复苏培养的初步研究[D];内蒙古农业大学;2011年
8 弓超;嗜热菌糖苷酶基因转染奶牛乳腺上皮细胞的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
9 董利锋;不同缓释速度瘤胃调控剂对瘤胃亚急性酸中毒体外发酵参数的影响[D];四川农业大学;2011年
10 文奇男;不同添加剂对水稻秸青贮品质及奶牛生产性能的影响[D];东北农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 祁宏;苗永旺;;牛α_(S1)酪蛋白基因变异及其与生产性状的关系[J];中国牛业科学;2009年04期
2 胡菡;王加启;李发弟;卜登攀;李喜艳;周凌云;;游离亚麻酸对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸代谢相关基因mRNA转录的影响[J];动物营养学报;2010年05期
3 李喜艳;王加启;魏宏阳;卜登攀;胡菡;周凌云;;奶牛乳腺上皮细胞的体外培养方法及其应用概述[J];华北农学报;2010年S2期
4 王秀美;考桂兰;高爱武;侯先志;高民;;奶牛乳腺上皮细胞三维培养的形态观察[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2009年04期
5 杨金勇;吴跃明;刘建新;;蛋氨酸和蛋氨酸二肽对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白α_(s1)基因表达的影响[J];农业生物技术学报;2007年01期
6 万中英;佟慧丽;李庆章;高学军;;王不留行增乳活性单体对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响[J];乳业科学与技术;2010年02期
7 张莉;李庆章;陈建晖;高学军;田雷;;牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达[J];生物化学与生物物理进展;2008年12期
8 陈瑞环;汪波;张玉芝;刘伟;张靖溥;劳为德;;牛α-s1酪蛋白基因5’端及上游区的克隆鉴定和部分序列分析[J];生物工程学报;1992年03期
9 刘春龙;李忠秋;张帆;姜文博;徐岩;单安山;;大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响[J];畜牧兽医学报;2008年11期
10 王亨;孟霞;邱昌伟;马翀;李建基;齐长明;;脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞先天性免疫反应[J];中国兽医学报;2010年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 高亚军;山羊乳腺上皮细胞的体外培养[D];西北农林科技大学;2005年
2 崔立莉;奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系的建立及其应用[D];新疆农业大学;2006年
3 杨金勇;蛋氨酸、赖氨酸及其二肽对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白α_(s1)基因表达的影响[D];浙江大学;2006年
4 王治国;奶牛乳腺上皮细胞的体外培养及应用[D];中国农业科学院;2007年
5 曹艳红;奶山羊乳腺脂肪酸合酶基因表达的RNA干扰研究[D];西北农林科技大学;2008年
6 陈建晖;奶牛乳腺上皮细胞系的建立[D];东北农业大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴媛媛;李键;杨栎;毕琳;田甜;;牦牛乳腺上皮细胞的体外培养的研究[J];西南民族大学学报(自然科学版);2009年04期
2 王亨;孟霞;邱昌伟;马翀;李建基;齐长明;;脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞先天性免疫反应[J];中国兽医学报;2010年03期
3 江青东;乔宏兴;;大鼠乳腺上皮细胞的体外培养与鉴定[J];郑州牧业工程高等专科学校学报;2010年04期
4 李楠;高学军;;雌激素及其受体对动物乳腺上皮细胞泌乳性能的影响[J];中国畜牧兽医;2011年04期
5 王亨;吴培福;邱昌伟;王梅;韩超;齐长明;;荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的体外培养[J];畜牧与兽医;2007年04期
6 陈建晖;高学军;李庆章;;奶牛乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展[J];东北农业大学学报;2009年07期
7 孟丽丽;钟凯;朱河水;;乳腺上皮细胞在乳腺炎症反应中的作用[J];中国畜牧兽医;2009年12期
8 郑月茂,彭新荣,徐永平,石玉强,张涌;体外培养的山羊乳腺上皮细胞形态研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2004年03期
9 杜娟;狄和双;郭亮;李忠浩;蔡亚非;王根林;;高温对乳腺上皮细胞生长及凋亡的影响[J];动物学报;2006年05期
10 弓超;王凌云;周欢敏;;牛乳腺上皮细胞体外分离和培养[J];动物医学进展;2011年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭长义;蒋宗勇;林映才;蒋守群;马现永;郑春田;;两种离体培养猪乳腺上皮细胞方法的比较[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
2 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
3 刘盼琦;吴旭颖;王九峰;;新型抗菌肽对大肠杆菌侵染的牛乳腺上皮细胞免疫功能的影响[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
4 万中英;高学军;佟慧丽;李庆章;;王不留行增乳活性成分对奶牛乳腺上皮细胞信号转导途径的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
5 马燕芬;高民;卢德勋;;果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及风味影响的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
6 李慧铭;王春梅;李庆章;黄田英;;miR-15a对奶牛乳腺上皮细胞功能的调控[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
7 郑月茂;安志兴;赵慧英;张涌;;山羊乳腺上皮细胞的培养及染色体数目分析[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
8 陈志敏;蔡辉益;刘国华;常文环;张姝;于会民;;日粮赖氨酸的不同添加水平对肉仔鸡肝脏和肌肉中IGF-1 mRNA丰度影响的研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
9 王亨;吴培福;韩超;王梅;齐长明;;荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的体外培养[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
10 吴娟;王申元;王凤龙;;TNF-α对培养奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陆志城;ABCG2“排毒”亦“吸毒”[N];医药经济报;2005年
2 刘少华;预防乳腺癌饮食有讲究[N];大众卫生报;2004年
3 红 光;吃出健美的胸部[N];大众科技报;2003年
4 记者 杨强;“GH”京城博弈“CY”[N];中国知识产权报;2008年
5 ;乳腺增生的中医治疗[N];大众卫生报;2001年
6 罗四林;克隆技术:一座挖掘不尽的金矿[N];农民日报;2002年
7 时仲省;在饮食中适量添加钙和VD[N];中国医药报;2000年
8 ;杨向中等发现克隆牛初生死亡奥秘[N];中国畜牧报;2002年
9 申郑堂;乳癌的高发年龄:35岁——69岁[N];大众卫生报;2002年
10 新文;英发现端粒酶可能致细胞癌变[N];中国医药报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王秀美;二、三维培养模式对奶牛乳腺上皮细胞泌乳代谢相关基因的影响[D];内蒙古农业大学;2013年
2 朱玮;β-葡聚糖增强大鼠乳腺上皮细胞的自主防御及其机制研究[D];南京农业大学;2011年
3 胡骏鹏;日粮能量对朗德鹅和溆浦鹅生长性能及肌肉生成抑制因子(MSTN)基因表达影响的研究[D];华中农业大学;2008年
4 高雪;牛生长发育性状候选基因的分子标记研究[D];西北农林科技大学;2004年
5 陆黎敏;MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控作用及机理研究[D];东北农业大学;2013年
6 郭军;BMP-2联合IGF-I体外干预诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究[D];重庆医科大学;2013年
7 李吉霞;牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 史旭升;日粮氨基酸模型对生长鹅IGF-I及其受体基因表达影响的研究[D];吉林农业大学;2012年
9 狄和双;TGF-β_1对奶牛乳腺细胞凋亡的影响及其机理研究[D];南京农业大学;2008年
10 杨磊;IGF-I和HSV-tk联合基因转移优化创面愈合的研究[D];第一军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 季昀;GH和IGF-I对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的调节作用机制[D];扬州大学;2013年
2 邢艳苹;IGF-I和HGF对奶牛乳腺上皮细胞合成乳脂乳蛋白的调节IGF-I[D];吉林大学;2012年
3 周凡;中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用的研究[D];安徽农业大学;2010年
4 李艳;奶牛乳腺上皮细胞系的建立及生理功能鉴定[D];扬州大学;2011年
5 曹琪娜;采用自制培养基培养奶牛乳腺上皮细胞可行性研究[D];内蒙古农业大学;2012年
6 徐柏林;精氨酸对乳腺上皮细胞中酪蛋白合成的影响及其调控机制[D];扬州大学;2012年
7 弓超;嗜热菌糖苷酶基因转染奶牛乳腺上皮细胞的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
8 杨银芬;消化酶、血清和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响[D];内蒙古农业大学;2012年
9 王红芳;外源反-10,顺-12共轭亚油酸对牛乳腺上皮细胞脂肪合成的影响及其分子机制[D];山东农业大学;2011年
10 杨苗;奶牛乳腺上皮细胞低温保存与复苏培养的初步研究[D];内蒙古农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026