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《扬州大学》 2001年
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新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制

胡北侠  
【摘要】: 以国内新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)标准强毒株F_(48)E_8 接种10日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液经蔗糖密度梯度离心后获得较 纯的病毒。以纯化的NDV建立了间接ELISA方法,并用于单抗筛选的第 一检测系统。应用蓝斑筛选技术对表达NDV融合蛋白(Fusion Protein,F)的 重组鸡痘病毒(Recombinant Fowlpox Virus,rFPV)进行筛选后获得较纯的重组 病毒,通过间接免疫荧光(Immunofluorescence,ⅡF)试验证实了NDV F基因 在rFPV中的表达。用纯化的rFPV感染96孔细胞培养板上次代鸡胚成纤维 细胞(Chicken Embryo Fibroblast,CEF),建立了检测单抗的ⅡF方法,作为 单抗筛选的第二检测系统。 以纯化的NDV和经SDS-PAGE分离的NDV F蛋白免疫BALB/C小 鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA和ⅡF试验反复筛选并三次 亚克隆后共获得7株能够稳定分泌针对NDV F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细 胞,分别命名为C_5-2-A_7、F_7-G_5、F_9-2-G_5、B_2-C8-F_(10)、C_(11)-C_6-E_2、55-C_2- A_9,51-F_6-F_7。其中前5株是用NDV全病毒作免疫原,后2株是用SDS- PAGE分离的F蛋白作免疫原。单抗的生物学特性鉴定表明:7株单抗均无 血凝抑制性(HI),而单抗中和性各有差异。此外,对单抗的免疫球蛋白 胡北侠:新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制 三 亚类、所针对的抗原表位,ELSA效价等进行了鉴定和研究。Western blot 结果显示:除F7-G,、Cll-C6-EZ外,其它单抗均能识别56KD的蛋白多肽; 其中 CS一2-A7、F7一GS、Fg一2一GS、BZ一CS一FI*,C;;一q一EZ 5株单抗的 ELSA效 价明显比 55-CZ-Ag,sl-F6-F7 2株高。用这 7株单抗对国内夕不同时期分离 的NDV毒株进行排谱发现,单抗几乎可以与所有毒株反应,表明所得的单 抗都是针对 NDV F蛋白的抗原保守区。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S852.43

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【引证文献】
中国重要会议论文全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
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2 蔡丽娅;临床新城疫病毒分离鉴定及F蛋白单克隆抗体的研制与应用[D];扬州大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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【共引文献】
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3 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
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9 曾政;任远志;叶昭辉;凌洪权;杨泽林;熊仲良;;重庆市2009年犬狂犬病检测及流行病学调查[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
10 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
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9 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
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4 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
5 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
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8 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
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中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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【二级引证文献】
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1 鹿钟文;小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2012年
【二级参考文献】
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7 周伦江;庄向生;陈少莺;;新城疫病毒的分子生物学及应用研究进展[J];中国家禽;2006年20期
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6 徐玲霞;刘梅;程旭;周生;韦玉勇;戴亚斌;;鸭源新城疫病毒强毒株P基因及V蛋白的遗传分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
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4 胡北侠;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2001年
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